生物污染的处理

培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之；有细胞株留存的或可购买的，可在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购买细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下方法清除。

一、抗 生 素

抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素（青霉素100U／ml加链霉素100μg／ml），污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48h，再换常规培养液。此法在污染早期可能有效。根据污染的情况，还可用庆大霉素、卡那霉素、多黏菌素、四环素、两性霉素B、制霉菌素等。常用400～800μg／ml卡那霉素或200μg／ml四环素处理，每隔2～3d换液1次，传1～2代进行污染的排除。支原体对β－内酰胺类、万古霉素、多黏菌素、利福平、磺胺等不敏感或耐药。对支原体最有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等，氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小的抑制作用。近年来有报道，4－氟－2－羟基喹啉（ciprofloxacin，Cip）、截短侧耳素衍生物（pleuromutilin derivative）和四环素衍生物等3种抗生素单用或合用对杀灭支原体有效。这三种抗生素均用PBS配成250倍浓缩液，－20℃保存备用，使用浓度Cip为10μg／ml，截短侧耳素衍生物为10μg／ml，四环素衍生物为5μg／ml。使用时先吸除污染的培养液，加入含截短侧耳素衍生物的RPMI1640培养液，3d后再吸除培养液，加入含四环素衍生物的RPMI1640培养液，培养4d，如此连续3个轮次，直至用Hoechst33258荧光染色镜检证明已清除支原体后，再加正常培养液培养传代3～4次。新一代支原体抗生素M－Plasmocin（InvivoGen公司），能有效的杀灭支原体，又不影响细胞本身的代谢，而且处理过的细胞不会重新感染支原体。

二、加温处理

将污染的组织培养物放在41℃培养18h，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。所以在处理前要进行预试验，摸索能最大限度杀死支原体又对细胞影响最小的加热时间。此法有时不可靠。若先用药物处理后，再以41℃加温处理效果更佳。

三、支原体特异性血清

用5%的兔支原体免疫血清（血凝效价1∶320以上）可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11d即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法不如用抗生素方便、经济。

四、其他方法

除了上述去除污染的方法外，还有动物体内接种除菌法、巨噬细胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及过滤法等，但均较麻烦，且效果不确定。所以一旦支原体污染，除非有特别重要价值，一般均弃之重新培养。