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细胞培养实验室的设备

时间:2022-04-08 理论教育 版权反馈
【摘要】:与大多数实验室一样,组织培养实验室要求的设备可简单分为基本设备和特殊设备。基本设备是一个组织细胞培养实验室必需的仪器设备,缺少其中的任何一个,工作开展就会受到挫折。倒置显微镜不仅可以充分观察培养的生长状态,还可以将不同阶段有价值的细胞组织状态记录下来,如细胞形态及培养液是否被污染等。如有条件,配备2个培养箱是必要的。目前规模化组织细胞实验室常选择电子活细胞计数器。具体根据实验室规模及需求进行配置。

与大多数实验室一样,组织培养实验室要求的设备可简单分为基本设备和特殊设备。基本设备是一个组织细胞培养实验室必需的仪器设备,缺少其中的任何一个,工作开展就会受到挫折。特殊设备是基本设备的有益补充和提高,能够帮助研究工作更快更好地开展,并且在分析结果时更加精准和充实。

一、基本仪器设备

(一)显微镜

包括配置有数码照相功能的倒置显微镜、正立显微镜、解剖显微镜等。还应有数据线和存储卡,以便将图片随时输入电脑,进行必要的分析。倒置显微镜不仅可以充分观察培养的生长状态,还可以将不同阶段有价值的细胞组织状态记录下来,如细胞形态及培养液是否被污染等。

(二)培养箱

主要是CO2培养箱,可以调节湿度和温度。具有显示CO2浓度、湿度和温度3个指标的功能。为了避免显示器的失误造成不可挽回的损失,最好在培养箱内放置一支体温计。如有条件,配备2个培养箱是必要的。为了确保箱内的清洁环境,还应当定期用乙醇进行擦拭。培养物品从培养箱取到洁净区或者其他无菌台使用时,应先用乙醇擦拭后,再进行操作使用。这对于有加湿器的CO2培养箱是尤其重要的。

(三)超净工作台

是为培养用液过滤、细胞分离接种、传代培养等提供无菌操作环境的重要设备。

(四)干燥箱

最好是电热干燥箱。可以精确调节干燥箱内的温度,注意干燥时避免将不耐热的物品置于高温中。对于吸管和玻璃器皿的灭菌来说,通过干热方式灭菌更加可取,当然这需要用到160~180℃,如电热鼓风干燥箱也可以选择。

(五)水纯化装置

制备蒸馏水和超纯水,用于清洗物品及配置各种液体。最好不要用储存纯水。最好定期对水纯化装置(包括盛水装置)进行藻类检查,如密理博Biolcell纯水系统。

(六)冰箱

包括普通-20℃冰柜及-80~-70℃的超低温冰箱,普通家用冰箱温度在4℃和-20℃,常用来储存培养液、生理盐水、Hanks液等培养用的物品及短期保存的组织标本。-20℃低温冰箱则用于储存需要冷冻保持生物活性及较长时间存放的制剂。该冰箱应属专用,不得存放挥发易燃易爆等对细胞有害的物质,注意要保持清洁。

(七)细胞冷冻储存器

主要是液氮罐。可以分为窄颈瓶和宽颈瓶两种,前者主要属液氮运输容器,后者取放方便,所以一般用后者。液氮罐的选择取决于需要的容量和经济条件。每个细胞系至少冷冻5瓶以上的原代,20瓶供使用。一般,一个小型实验室有一个容量为1 200~1 500 ml的低温储藏器就可以了。

(八)离心机

若需细胞沉降,一般使用80~100g的离心力即可,因此离心机配置最大每分钟4 000转即可。另外,可根据需要添加其他类型离心机,如容量大的或可以调节温度的离心机(如低温高速离心机)等。

(九)天平

常用的有扭力天平和精密天平(如电子天平)。一般配备一个称量范围在10mg~100g的电子天平就足够了。电子天平的使用遵循一般实验室原则及天平产品说明书。

(十)消毒器

直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。可以另外设置统一的消毒供应室,有些常用的较大物品可由该室消毒灭菌后提供。临时需用的物品或易破损的器皿还需细胞培养室自行消毒,所以应该配置基本的消毒器,如手提式高压蒸汽消毒器。

(十一)细胞记数设备

是组织细胞实验室必备的设备。普通实验室常用血细胞计数板,是最方便和实惠的选择,可通过台盼蓝染色进行活细胞计数。目前规模化组织细胞实验室常选择电子活细胞计数器。

(十二)特殊设备

除了上述常用的实验设备外,还有一些特殊的仪器设备,如振荡培养仪、磁力搅拌仪、酶联免疫检测仪、旋转培养器,荧光显微镜流式细胞仪、程序降温仪、低温高速离心机、超声波清洗机等。具体根据实验室规模及需求进行配置。

二、常用的培养器皿

(一)培养瓶

用于培养、繁殖细胞。进行培养时,瓶口应以螺旋盖或胶塞盖住,胶塞用于密封培养。

(二)培养皿

由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、放射性核素掺入、细胞繁殖等实验使用。常有的培养皿规格有直径10cm、9cm、6cm和3.5cm等几种规格。

(三)多孔培养板

为塑料制品,可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。

(四)玻璃瓶

主要用于存放或配制各种培养用的液体,如培养液、血清及试剂等。

(五)吸管

主要有刻度吸管以及尖吸管。常用的规格有1ml、2ml、5ml和10ml等规格,后两种使用较少。除了具有加样移液的作用外,吸管还可用来吹打混匀细胞的作用。

(六)加样器

用于吸取,移动液体或滴加样本。微量加样器的出现使得精确的微量加样成为现实。

(七)其他用品

除以上主要用品外,还有收集细胞用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的试管架,装放吸管以便消毒的大玻璃筒或不锈钢筒,用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝饭盒或贮槽,套于吸管顶部的橡皮吸头,封闭各种瓶子和管子的胶塞、盖子、冻存细胞用的冻存管、不同规格的注射器、烧杯和量筒及漏斗等。

三、常用器械

主要用于解剖、取材、剪切组织及操作等持取物品。常用的手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪;用于解剖动物,分离及切剪组织,制备原代培养的材料;眼科虹膜小剪,用于将组织材料剪成小块;血管钳及组织镊、眼科镊,用于持取无菌物品如夹持组织等;口腔科探针或代用品,用于放置原代培养的组织小块。

(张教扬)

参 考 文 献

[1]司徒镇强,吴军正.细胞培养.西安:世界图书出版公司,1996:2139

[2]R.I.弗雷谢尼.动物细胞培养——基本技术指南.章静波,徐存拴,等,译.第4版.北京:科学出版社,2004:3657

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