细胞学标本制片方法

Hampeln的1887年报告了1例支气管肺癌病例，先在病人的痰中发现了癌细胞，并进一步活检证实。1919年他又报告了1组25例肺癌病例，其中有13例患者痰中癌细胞为阳性。此后痰标本直接涂片已成为肺肿瘤的常规检查方法，得到临床医师的肯定，取得很好的效果。大离心管消化液消化黏液离心沉淀涂片是一个较好的收集细胞、去除黏液进行直接涂片的方法（图1-16），在日本广泛应用，取得良好效果。国内曾经有商家开发，可惜开展不多。其后出现的消化去黏直接或液基薄层细胞学制片（liquid-based thinlayer：ThinPerp＆AutoCyte）改进了黏液影响制片、细胞过于分散、炎细胞量多或背景脏乱等问题。但要用这些方法替代直接涂片法或评价新方法优于传统的直接涂片法为时尚早。

（一）液基法制片技术

液基薄层细胞制片技术是指薄层制片自动装置制备细胞学标本（涂片或印片）的技术。这些装置研发于20世纪末期，根据实践应用的体会和经验介绍一家美国公司（BD）的产品，本书病例所用制片大部分采用Auto Cyte PREP液基细胞学薄片装置（又称LCT）制片。这种装置属细胞学自动制片染色装置，其原理为沉降法。在自动制片前有一步离心过程，离心沉淀后的细胞数量更集中，经机器搅拌后采用自然沉淀法的原理制成分布均匀的巴氏涂片，同时并不破坏细胞碎片或影响对细胞之间结构的观察。同时可进一步由AutoPap细胞自动扫描设备进行电脑阅片及初筛，具有节约初筛人力、客观性好和防止漏诊等优势，可集中技术资源优势，有利进一步发展的潜力，两项同做客观性较好。

图1-16　痰标本的消化法去黏、沉淀处理步骤

A．含有消化试剂的消化液；B．痰标本置入；C．震荡摇匀消化；D．离心沉淀后弃去上清液
引自：加藤治文等．早期肺癌．日本金原出版

Auto Cyte PREP机一次可制做48张涂片，耗时约2h，制成的涂片内容物限在直径约1．3cm的圆形薄层物，其细胞分布均匀，有少量重叠但无牵拉变形，细胞无退化变性，染色效果好，符合诊断要求。同一病例可重复做涂片。在观察时由于细胞的沉降有先后，立体感很强，需要转动微调观察。

除上述液基细胞制片装置外，还有一些国外厂家生产的半自动或手动的液基薄层细胞技术在近年来陆续进入中国市场。近年来国内也陆续出现了国产的液基薄层细胞制片装置，更值得一提的是其耗材的成本低，使其竞争力增强，有利于该装置的普及。

（二）离心法液基制片技术

Cytospin离心机式制片装置，又称细胞离心涂片机，是利用离心旋转的原理制备细胞学涂片的一种仪器，由于其兼有离心、过滤、旋转、转送等综合功能，成为细胞学实验室必备的仪器设备。该仪器每次可处理多个标本，对体液标本或细胞悬液较多的细胞学实验室来说，发挥的作用较大。

（三）滴加法液基制片技术

基层医院可采用手工滴加法制片，制片步骤如下。

将经过离心沉淀标本混匀（可采用振荡仪振荡）的悬液滴在经过特殊处理（防脱片处理）的载玻片上。用300μl左右蒸馏水稀释细胞悬液（根据沉淀浓度加入适量水），振荡5s混匀。用一次性的试管取2～4滴细胞混合液到入装有细胞分散液的试管内，振荡5s混匀。然后取2～4滴细胞悬液滴到水平放置的载玻片上。滴液将均匀地散开至直径为16～20μm的圆形细胞沉降液区域，稍置放至潮干状态时立即入95%乙醇固定液固定1h，进行染色。

（四）细胞块制备技术

将获取的细胞量丰富的痰液、支气管刷检或穿刺针吸标本用中性甲醛液固定，石蜡包埋，行组织学处理技术，制片后供细胞学检查，这种方法尤其适用于微小颗粒或离心标本的细胞学标本的免疫化学染色。