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真菌及其检验

时间:2022-03-16 理论教育 版权反馈
【摘要】:另外,因寄生环境或培养条件不同而出现两种形态的真菌称为二相性真菌。4.真菌的培养与繁殖。5.真菌抵抗力。6.可引起人类真菌性感染、真菌性变态反应和真菌毒素中毒等。引起的疾病有致病性真菌感染、条件致病性真菌感染、真菌过敏、真菌中毒、真菌毒素致癌等。③乳酸酚棉兰染色适用于各种真菌的检查。②皮肤真菌试验培养基用于分离皮肤真菌。

(一)基本特性

1.真菌是真核细胞型微生物,属真菌界,具有典型细胞核,以寄生方式生存,由单细胞或多细胞组成,能进行有性生殖和(或)无性生殖。自然界分布广泛,数量极多,绝大多数对人类有益,如食用真菌、能产生抗生素的真菌等,致病的仅150余种。主要真菌有接合菌亚门、子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门,绝大部分致病性真菌属于半知菌亚门。

2.形态有单细胞和多细胞两种。单细胞真菌常见的有酵母菌或类酵母菌,以出芽方式繁殖,类酵母菌有假菌丝,如白假丝酵母、隐球菌。多细胞真菌由菌丝和孢子组成,菌丝形成丝状体,称为丝状菌(霉菌),如皮肤癣菌等。另外,因寄生环境或培养条件不同而出现两种形态的真菌称为二相性真菌。在培养基上37℃培养为酵母型真菌,25℃培养为霉菌型真菌,如球孢子菌、组织胞浆菌、芽生菌和孢子丝菌、副球孢子菌等。

3.真菌的结构。基本结构为菌丝和孢子。

4.真菌的培养与繁殖。不需复杂的营养就能生长,最常用的为沙保弱培养基,最适温度为22~28℃,某些深部病原性真菌在37℃生长良好,最适pH 5.0~6.0。少数酵母菌以二分裂繁殖,多数以出芽、形成菌丝、产生孢子以及菌丝分支与断裂等方式繁殖。真菌的繁殖力极强,但生长速度较慢,如皮肤丝状菌,2周才形成典型菌落。真菌菌落有3种类型。①酵母型菌落:酵母菌及隐球菌多为此种菌落。②酵母样菌落:如白色念珠菌。③丝状菌落:菌落呈棉絮状、绒毛状或粉末状,正面和背面可有不同颜色,常作为鉴定菌种的参考,如毛霉菌和皮肤丝状菌等。

5.真菌抵抗力。热的抵抗力弱,一般60℃1h即被杀死。对干燥、日光、紫外线及多数化学药品的耐受性较强;对1%~3%石炭酸、2.5%碘酒、0.1%的升汞及10%甲醛比较敏感。对常用抗生素如四环素、青霉素、链霉素等均不敏感,灰黄霉素、制霉菌毒、两性霉素等对某些真菌有抑制作用。

6.可引起人类真菌性感染、真菌性变态反应和真菌毒素中毒等。引起的疾病有致病性真菌感染、条件致病性真菌感染、真菌过敏、真菌中毒、真菌毒素致癌等。①致病性真菌感染:可引起皮肤、皮下及全身性感染,主要是一些外源性感染。②条件致病真菌感染:主要是内源性真菌引起(如念珠菌、曲霉菌、毛霉菌等),在机体免疫力降低时发生。③真菌变态反应性疾病:在临床变态反应疾病中有一些由真菌引起,常见的有荨麻疹、接触性皮炎、哮喘等。④真菌性中毒:人、畜食用含真菌的粮食、饲料后可导致急性或慢性中毒,引起中毒的可以是真菌本身,也可以是真菌产生的毒素。⑤真菌毒素与肿瘤的关系:如黄曲霉毒素有较强致肝癌作用。

(二)微生物学检查

常用直接检查、培养检查这两种方法即可确定致病真菌的种类。

1.直接检查法

(1)不染色标本的直接检查:少量标本置载玻片上,加适量生理盐水(如为毛发、皮屑,须加10%~20%氢氧化钾),盖上盖玻片,加热使标本组织溶解透明,分别用低倍镜、高倍镜观察是否有酵母型细胞、菌丝、菌丝体、孢子等。

(2)染色标本检查:标本涂片,固定后革兰染色或乳酸酚棉兰染色、镜检,观察有无酵母型细胞、菌丝、菌丝体和孢子。①革兰染色适用于酵母菌和类酵母菌的染色。②墨汁负染色适用于隐球菌的检查,可见新型隐球菌具宽厚荚膜。③乳酸酚棉兰染色适用于各种真菌的检查。④瑞氏染色适用于检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌。

(3)直接检测抗原:用乳胶凝集试验、ELISA检测血清、脑脊液标本中的隐球菌抗原,乳胶凝集试验也可检测标本中白色念珠菌抗原。

2.培养检查法

(1)常用真菌培养基:培养基是分离培养成败的重要因素之一,一般可用沙保弱培养基。培养基中常加入一些选择性抑制剂,有利于选择培养。所有分离标本应孵育至少4周。观察菌落生长是鉴别真菌的主要方法之一。①沙保弱培养基广泛用于深浅部真菌的常规培养。②皮肤真菌试验培养基用于分离皮肤真菌。③左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基用于分离新生隐球菌。④酵母浸膏磷酸盐琼脂用于分离荚膜组织胞浆菌和皮炎芽生菌。⑤马铃薯葡萄糖琼脂观察真菌菌落色素,用于鉴别真菌。⑥脑心葡萄糖血琼脂用于培养深部真菌,使二相性真菌呈酵母型。⑦尿素琼脂用于鉴别酵母菌和类酵母菌,石膏样毛癣菌和红色毛癣菌。⑧玉米粉聚山梨酯-80琼脂用于培养白色念珠菌(白色假丝酵母),以观察其形成的厚膜孢子和假菌丝。

(2)培养方法:①真菌分离培养、传代和保存菌种最常用的方法是试管培养。②玻片小培养可用于真菌菌种的鉴定。③平皿培养只能培养生长繁殖较快的真菌。

(3)鉴定:主要依靠菌落特点、菌丝和孢子的形态特点,菌丝体上有无特殊的结构等对真菌进行鉴定。

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