需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及其检验

（一）白喉棒状杆菌

1．生物学性状 白喉棒状杆菌为细长微弯、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌，细菌排列成不规则栅栏状或L、V、Y字形。用亚甲蓝、Albert法、Neisser法等染色可显示与菌体着色不同的异染颗粒。为需氧或兼性厌氧菌，营养要求高，在血平板长出灰白色、不透明的S型菌落；在吕氏血清鸡蛋清斜面生长迅速，形成灰白色细小有光泽的菌落，涂片染色异染颗粒明显；在亚碲酸钾血平板能还原碲盐为元素碲，使菌落呈黑色。生化反应为触酶阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、糊精、还原硝酸盐；不分解乳糖，不液化明胶、吲哚和脲酶试验阴性。根据亚碲酸钾血琼脂培养基、肉汤培养基的生长特点及生化反应，可将本菌分为轻、中、重三型。

2．微生物学检验 在使用抗生素前用无菌长棉拭子采集疑似菌膜边缘或鼻咽部和扁桃体分泌物，通常取双份标本。将标本直接涂片，分别做革兰染色和异染颗料染色，镜检符合者可做初步报告；接种于吕氏血清斜面和亚碲酸钾血平板进行分离培养，两种培养基发现典型菌落和菌体或在亚碲酸钾血琼脂平板上菌落典型，即报告为阳性；若只吕氏血清斜面培养基上的菌落及菌体形态典型，可暂报告为可疑；若两者均为阴性，必须观察72h后方可作出报告。毒力试验：可作为鉴定致病菌株的重要依据。

3．临床意义 白喉棒状杆菌是急性呼吸道传染病白喉的病原体，该病原菌存在于患者及带菌者的鼻咽腔中，随飞沫或污染的物品传播。白喉杆菌的致病因素为白喉外毒素、K抗原及索状因子。

（二）炭疽芽胞杆菌

本菌是致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平，呈竹节状，新鲜标本直接涂片染色可见呈单个或短链状排列，无鞭毛，机体内或含血清培养基上可形成荚膜，观察荚膜可用俄尔特（Olt）染色，荚膜呈黄色，菌体呈褐色。在有氧条件下形成位于菌体中央但小于菌体的芽胞。需氧或兼性厌氧，在普通培养基上形成灰白色、扁平、干燥、粗糙型菌落，在低倍镜下呈卷发状，血平板可有轻微溶血。有毒株在NaHCO3血平板，5%CO2环境中可产生荚膜，菌落由R型变为M型，以接种针挑取M型菌落可见拉丝现象。本菌触酶阳性，能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，能水解淀粉，不分解乳糖；能迟缓液化明胶，沿穿刺线向四周扩散，形如倒松树状。抗原包括菌体多糖、荚膜多肽、芽胞和炭疽毒素抗原，菌体多糖经长时间煮沸而不被破坏，能与相应抗血清发生环状沉淀试验，即Ascoli热沉淀反应。本菌芽胞抵抗力很强。炭疽芽孢杆菌为人畜共患病炭疽的病原体。

标本直接涂（印）片染色包括革兰染色、俄尔特荚膜染色、芽胞染色、荚膜荧光抗体染色和荚膜肿胀试验镜检；新鲜标本经增菌或直接接种于血平板或戊烷脒血琼脂（选择培养基）分离培养；接种于肉汤培养基呈絮状沉淀生长。鉴定试验：①串珠试验；②青霉素抑制试验；③重碳酸盐毒力试验：将待检菌接种于NaHCO3血平板；④动物实验；⑤植物凝集素试验；⑥噬菌体裂解试验。Ascoli试验可辅助诊断。

（三）蜡样芽胞杆菌

本菌为革兰阳性大杆菌，菌体两端钝圆，呈链状排列，芽胞位于菌体中心或次末端不突出菌体，引起食物中毒的菌株多有周毛菌。营养要求不高，菌落较大，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，故名蜡样杆菌。在血琼脂平板上呈β溶血。对热抵抗力强，能耐受100℃30min。标本采集可疑食物和病人吐泻物，除直接涂片染色镜检和分离培养外，还需进行活菌计数。食入被大量的蜡样杆菌污染（106～108／g）的食物可致食物中毒，有腹泻型与呕吐型之分，致病因素为不耐热腹泻型肠毒素和耐热呕吐型肠毒素。

（四）产单核李斯特菌

本菌为革兰阳性短小杆菌，常呈V字形或成双排列，有鞭毛，在20～25℃运动活泼，无芽胞，幼龄菌呈革兰阳性，陈旧培养物多转为革兰阴性。需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在血平板上培养数天后形成小而透明的S型菌落，周围有狭窄的β溶血环，在半固体培养基中可出现倒伞形生长，4℃可冷增菌。耐盐和耐碱，但对酸、热敏感。标本经4℃冷增菌接种血平板，菌落符合做涂片染色镜检并进一步鉴定。鉴定依据：在血琼脂上有狭窄的β溶血环，在半固体培养基上呈倒伞形生长，25℃动力最强，可在4℃冷增菌生长，CAMP（与金黄色葡萄球菌协同溶血）和触酶阳性，木糖、甘露醇和H2S阴性。