植物体内硝态氮含量的测定

【目的要求】　硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥力中氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

【实验原理】　在浓酸条件下，NO－3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（pH＞12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。

【实验材料与仪器设备】

1．实验材料　新鲜药用植物样品。

2．仪器试剂

仪器：722型分子光光度计1台、电子顶载天平1台（感量1／万）、刻度试管20ml　26支、刻度吸管（0．1ml、0．5ml、5ml、10ml）各1支、容量瓶50ml　8个、容量瓶25ml　3个、小漏斗（∮5cm）3个、玻棒1根、洗耳球1个、电炉1个、铝锅1个、玻璃塞、定量滤纸7cm。

试剂：

（1）500ppmNO－3标准溶液：精确称取烘至恒重的KNO30．7221g溶于无离子水中，定容至200ml。

（2）5%水杨酸－硫酸溶液：称取5g水杨酸溶于100ml，浓硫酸中（密度为1．84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。置冰箱保存1周有效。

（3）8%氢氧化钠溶液：称取10g氢氧化钠溶于1　000ml无离子水中即可。

【实验内容与方法】

1．标准曲线的制作

（1）吸取500ppm NO－3标准溶液1ml、2ml、3ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml分别放入50ml容量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、30、40、60、80、100、120ppm的系列标准溶液。

（2）吸收上述系列标准溶液0．11ml，分别放入刻度试管中，以0．11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0．4ml水杨酸－硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后再加入8% NaOH溶液9．51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为10．02ml。

（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。以NO－3N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2．样品中硝酸盐的测定

（1）样品液的制备：取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2～3g分别放入3支刻度试管中，加入10ml无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30min，到时间后取出，用自来水冷却，将冷却液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。

（2）样品液的测定：吸取样品0．1ml分别于3支刻度试管中，然后加入5%水杨酸－硫酸溶液0．4ml，混匀后置室温下20min，再慢慢加入9．5ml　8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测其吸光度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出NO－3－N浓度，再用下公式计算其含量。

NO－3N含量（μg／g鲜重）