的程序设计

1.总体要求　EQA的组织应从实际出发，由小到大，先在较小的范围内进行，取得经验教训，再扩大到全地区或全国。EQA的程序设计主要包括以下几个方面：①确定EQA计划，按照计划定期发放EQA样本并制定相关表格，要求参加单位逐项填写；②确定回报结果的量值单位和表示方法并通知参加室间质评的各个实验室；③按规定日期进行测定，并要求在指定的日期前将结果报送统计单位，逾期未报者不参加统计，回报结果的格式要求简洁清楚；④要求参与EQA的实验室在测定EQA样本时必须要使用同常规检测样本完全相同的操作流程进行测定；⑤对测定方法、试剂和仪器等进行归纳总结；⑥对参与EQA的实验室作出评价；⑦EQA的报告应迅速及时。

2.对EQA样本的要求

(1)为减少基质效应，要求EQA样本与采自临床患者的标本的基质尽量一致。例如，临床标本为血清则EQA标本也应为血清；而某些临床标本如痰、鼻咽拭子、宫颈拭子等，EQA样本的基质无法做到与其一致，此时可使用生理盐水等替代。

(2)EQA样本的浓度与该检测项目的临床应用相适应。应根据临床上最为常见的浓度范围及通常所采用的分析系统的检测下限去决定EQA样本的浓度，同时也应考虑医学决定水平的界点，增加EQA的实用价值。例如目前国内HBV DNA PCR检测试剂盒和HCV RNA PCR检测试剂盒的测定范围多在每毫升103或104～107拷贝数，测定下限通常在每毫升103或104拷贝数，因此在设计质评样本时，就不要使用低于每毫升103或104拷贝数的样本，但如设定过高的样本浓度也脱离了临床的实际需求，起不到应有质评的作用。

(3)样本在运输过程中的稳定性。EQA样本通常需要一个邮寄的过程，如在一个小范围内进行室间评价，可以采用液体质控血清。但参与全国范围EQA的实验室分布在不同地区，有些相对偏远的地区即使使用快递邮寄也需要较长的时间，故目前一般要求质评样本能在常温下稳定10d以上，这时液体质控血清往往不能满足要求。目前卫生部临床检验中心开展的全国HBV DNA和HCV RNA扩增检验的EQA样本均为冻干品，可确保室温下邮寄的稳定性。冻干血清具有含量准确，均一性好及成分稳定的特点，但使用时应注意全部溶解，注意避免强光照射。

(4)样本的传染危险性。与室内质控品相同，EQA样本应当经过灭活处理，消除已知的病原体的传染危险性。

3.组合设计原则　用于病原体核酸如HBV DNA、HCV RNA等的扩增检测EQA样本的组合设计原则是：每次质评样本数可为5～8份，包括1～2份强阳性、1～2份弱阳性、1～2份阴性及2～3份中等阳性(可为同一样本)，强阳性样本的功能是定性检测时可观察参评实验室对阳性标本的基本测定能力，在定量测定时可用于观察特定检测方法与特定分析系统条件下对接近方法测定范围上限的样本测定的准确度；弱阳性样本的功能在定性测定时观察参评实验室由于标本中病原体浓度较低所致的假阴性情况，在定量测定则是观察其所用测定方法及测定操作对接近方法测定范围下限的样本测定的准确性；2～3份中等阳性的同一样本检测则主要是为了来考量实验室测定的重复性；阴性样本是为了观察参评实验室因为扩增产物和(或)操作所致的“污染”发生。上述各类样本可在包括于一次EQA之内也可根据需要分开进行。

4.质评样本靶值的确定　临床核酸和基因扩增检验室间质评的靶值在定性测定时应为明确的阴性或阳性，并采用当时多家较好的试剂盒进行确认。目前定量测定调查样本的定值方法主要有：①使用可靠的决定性方法或参考方法定值(公认的定量方法如bDNA和COBAS Amplicor等，以国家或国标标准物进行溯源)；②采用生产质控血清时加入纯物质定值，即血清先经透析除去欲测成分，再加入定量的纯物质；③几个参考实验室常规方法测定，取均值作为该血清的定值；④使用参考实验室报告结果的均值为质控血清的定值。在EQA实施过程中，理论上参加的实验室越多，所得结果的分布越趋向常态分布，均值就越接近真值；实际情况也恰恰如此，参考实验室所得数值往往和各实验室的回报结果的修正均值(剔除超出均值±3S以外的数据后算得的均值)相似。