蔬菜中农药残留的快速检测

实验二　蔬菜中农药残留的快速检测

一、我国是世界上农药使用量最大的国家

我国是世界上农药生产和使用大国，目前我国现有农药生产定点企业2 500多家，现已登记并可以生产的农药品种有600多个。我国农药生产能力约为76万吨，总产量约为48万吨，农药年生产量仅次于美国而排名第二。同时，我国是世界上农药施用量最大的国家，平均年施用量超过130万吨，单位面积用量是世界平均水平的2倍。

目前我国农药产品结构不合理，产品质量低，存在3个70%:一是在各类农药产量中，杀虫剂占70%；二是杀虫剂中有机磷农药占70%；三是有机磷农药中高毒品种占70%。这些剧毒、高毒农药的大量使用给生态环境带来了日益突出的负面影响，并严重威胁着消费者的身体健康和生命安全。在《中国环境优先监测》报告中列出的一份有机污染物“黑名单”中，有机磷农药就占了7种。

二、农药的大量使用对我国食品安全和农产品出口贸易已产生十分严重的影响

随着人类生活水平和质量的大幅度提高，人们在吃饱的基础上对农产品及其加工食品的质量提出了更高的要求，特别是对农产品中的农药残留问题格外关注和重视。农产品中的农药残留超标可造成消费者急性中毒，出现头晕、呕吐等症状。长期食用农药残留超标的农产品或加工食品，会对消费者的身体造成慢性危害，并可能引发多种慢性疾病，如肿瘤、生育能力降低等。

农药残留超标带来的食品安全问题不仅影响消费者的健康，还在很大程度上影响了我国农产品出口贸易，进而影响整个农业的发展。近年来，我国农产品因农药残留超标而被进口国拒绝、扣留、退货、索赔和中止合同的事件时有发生。如2002年上海出口到韩国的紫菘因农药残留超标问题而遭到退货，造成直接经济损失达500多万元。一些国家更是利用国际贸易技术壁垒，人为地对我国农产品出口设置障碍。

三、我国已出台农药残留相关管理法规

鉴于食用农产品中农药残留超标带来的严重危害，我国于1997年和1999年，由国务院分别颁布了《中华人民共和国农药管理条例》和《中华人民共和国农药管理条例实施办法》。2001年11月29日修订的《中华人民共和国农药管理条例》第二十七条规定“使用农药应当遵守国家有关农药安全、合理使用的规定，按照规定的用药量、用药次数、用药方法和安全间隔期施药，防止污染农副产品。剧毒、高毒农药不得用于防治卫生害虫，不得用于蔬菜、瓜果、茶叶和中草药材”；第三十七条规定“县级以上各级人民政府有关部门应当做好农副产品中农药残留量的检测工作，并公布检测结果”；第三十八条规定“禁止销售农药残留量超过标准的农副产品”。

四、以酶抑制法为原理的农药残留快速检测

如何快速、灵敏、准确地检测出农产品及其加工产品中的残留农药，是保障人民健康，控制农产品质量的关键环节。农药残留快速检测法操作简便、不需昂贵仪器，适合于现场检测及大批样品的筛选检测，主要用于防止有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒严重超标的蔬菜和水果流入市场，主要有酶抑制法，其原理即是AChE的活性受有机磷和氨基甲酸酯类农药抑制，根据乙酰胆碱酯酶受抑制程度的多少来确定有机磷和氨基甲酸酯类农药的含量。用该方法检测农药残留时，蔬菜中的水分、碳水化合物、蛋白质、脂等物质不会对检测造成干扰，可省却分离去杂步骤，从而达到快速检测的目的。这一方法在国内的使用范围最为广泛，同时已上升为国家标准。

五、实验部分

1.实验目的

学习并了解蔬菜中农药残留快速检测的技术方法和操作步骤。

2.实验原理

有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。在一定条件下，酶催化乙酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质。通过在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算抑制率，通过抑制率可以判断蔬菜中农药残留量是否超标。

3.所需试剂、仪器

农药残留快速检测试剂盒（上海捷门保林迈生物工程有限公司提供）、残留农药检测仪、微量移液器、常量天平、恒温水浴箱（37℃）。

4.操作步骤

按照使用说明书操作。

（1）试剂准备:按照试剂盒提供的操作说明，在A、B、C三个试剂瓶中加入缓冲溶液10mL，待完全溶解，摇匀即可。

（2）样品处理

①选取表面干净的待检蔬菜，用天平准确称取1g。叶菜取叶片部分，果菜、瓜菜沿皮削下一片。

②将蔬菜剪成1cm大小置于小烧杯内，加入5mL缓冲溶液，振荡2min。

③吸取烧杯中的上清液2.5mL，移至试管。

④另准备一试管，加入2.5mL缓冲液，作为空白管。在空白管和样品管中各加入A液和B液0.1mL，混匀，在37℃恒温水浴箱中放置15min以上。

（3）检测

①测试空白:在空白管中加入C液0.1mL，摇匀，立即放入仪器比色池中，进行对照设置，保存数值，作为空白对照。

②测试样本:在样本管中加入C液0.1mL，摇匀，立即放入仪器比色池中，保存结果并打印。

（4）注意事项

①复溶后试剂需在冰箱中保存。

②葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄等的汁液中含有影响乙酰胆碱酯酶活性的物质，容易引起假阳性。请避免剪碎，直接将整株浸在5mL缓冲液中即可。

③温度对酶的活性影响较大，检测时请保持室温恒定。空白管和样品管的测试温度尽量保持一致，以确保检测的准确。

④同一试剂在不同室温影响下空白可能不同，需重新测试空白以确保准确。

⑤当抑制率≥50%时，表示蔬菜中有有机磷和氨基甲酸酯农药存在，此时需重复检测2次以上以确保准确。