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酶与临床检验及科学研究

时间:2022-02-12 理论教育 版权反馈
【摘要】:在进行酶动力学研究时,经常需要测定酶促反应速率,但很多酶促反应的底物或产物不能被直接测定。催化生成可测定产物的酶称为指示酶;催化生成中间产物的酶称为辅助酶。例如临床上测定血糖时,葡萄糖经葡糖氧化酶氧化为葡萄糖酸,并释放H2O2,H2O2再经过氧化物酶催化与4-氨基安替比林及苯酚反应生成水和红色醌类化合物,红色醌类化合物在505nm处的吸光度与葡萄糖含量成正比,因此可用比色法计算出血糖浓度。

若干种酶已常规用于基因工程操作过程中。如Ⅱ型限制性内切核酸酶、DNA连接酶、反转录酶、DNA聚合酶等。

有些酶可作为指示酶(indicator enzyme)或辅助酶(auxiliary enzyme)用于酶偶联测定法。在进行酶动力学研究时,经常需要测定酶促反应速率,但很多酶促反应的底物或产物不能被直接测定。这时可在反应中偶联另一种或两种酶,使初始反应产物定量地转变为可测量的终产物。这种方法称为酶偶联测定法。催化生成可测定产物的酶称为指示酶;催化生成中间产物的酶称为辅助酶。例如临床上测定血糖时,葡萄糖经葡糖氧化酶氧化为葡萄糖酸,并释放H2O2,H2O2再经过氧化物酶(proxidase)催化与4-氨基安替比林及苯酚反应生成水和红色醌类化合物,红色醌类化合物在505nm处的吸光度与葡萄糖含量成正比,因此可用比色法计算出血糖浓度。此方法中的过氧化物酶即为指示酶。

有些酶可作为酶标记测定法中的标记酶。临床上过去一般都采用免疫同位素标记检测微量分子,但同位素应用有很大的局限性,因此目前大多已经以酶标记代替了同位素标记,如酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。标记酶与抗体偶联,利用抗原-抗体特异性结合的特性,检测抗原或抗体的含量。常用的标记酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶等。

(雷群英 徐莺莺)

参考文献

[1]查锡良,药立波主编.生物化学分子生物学.北京:人民卫生出版社,2013.

[2]David L.Nelson,Mechial M.Cox.Lehninger Principles of Biochemistry.5th ed.New York:W.H. Freeman and Company,2008,183-233.

[3]Lei Lv,Dong Li,Di Zhao,et al.Acetylation targets the M2isoform of pyruvate kinase for degradation through chaperone-mediated autophagy and promotes tumor growth.Mol.Cell 2011,42:719-730.

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