水生动物检测样品的采集

一、鱼类寄生虫样品的采集和保存

1.原生动物样品采集

血液中的原生动物 从鳃动脉或心脏取血，制做血涂片。

孢子虫的采集 孢子虫可用 4%的福尔马林固定保存，观察时用悬滴法制做水浸片，用甘油胶封固。也可将孢囊弄破，取内含物，制做水浸片。

皮肤、鳃、肠道中的原生动物 用弯头镊子夹取一小块带有寄生虫的鳃组织或肠道粘液等，均匀地涂在洁净的载玻片上，涂片时注意涂线均匀、平行，涂片越薄越好。将涂片涂面朝下，浮放于固定液上1分钟。翻转后，将涂面朝上，再固定15～20分钟。再将涂片从固定液中取出，用50%酒精洗去多余的固定液，放入70%酒精液中保存。

肖氏液适用于固定纤毛虫、变形虫和粘孢子虫。载氏液用于固定纤毛虫，特别是车轮虫。何氏液用于固定鞭毛虫类。无上述3种固定液时，可用布翁氏液代替。

2.蠕虫类样品采集

单殖类 单殖类个体较小，一般将带有虫体的组织置于解剖镜下，用小针将虫体从鳃上剥下，放入有清水的培养皿中，用吸管吸出，用适量固定液固定。

复殖类 小型复殖吸虫，一般采用摇动法固定。将虫体连同组织一起刮下，放入培养皿中，用生理盐水洗涤数次，使虫体与组织分开。将虫体移入指形管中，再装1/3蒸馏水，压紧瓶口，摇动3～5分钟，使虫体麻醉，再加满95%酒精，摇动1分钟，再用70%酒精保存。

中大型复殖吸虫，可用两片载玻片将虫体压平，从一端加入固定液，另一端用吸水纸将水份吸去，使固定液弥散于虫体四周。一段时间后，虫体变为不透明或与固定液同色，即示固定已完成。小心将玻片分开，用50%酒精将虫体洗下，放入70%酒精中保存。也可用细线将玻片系好，放入固定液中固定或直接在解剖镜下观察。

绦虫 绦虫的采集方法与吸虫相似。可用 F.A.A、70%酒精、5%福尔马林固定保存。采集时小心将虫体从寄生部位分离，大型绦虫可剪下头节和成熟节片固定。

线虫 用烧杯将固定液加热煮沸，将线虫置固定液中烫直，待固定液冷却后，移入70%的酒精中保存或 5%～10%的甘油酒精中。柔软和小型的线虫可用巴氏液（生理盐水+3%福尔马林）保存，不需加热。

线虫无需染色，一般用甘油酒精透明，最后移入纯甘油中观察。

棘头虫及蛭类 一般用布翁氏液、70%酒精、F.A.A 固定，也可用巴氏液。蛭类最好用1%～2%福尔马林固定。

二、病原微生物检测样品的采集与保存

样品的采集与保存是水生动物细菌性疾病诊断与致病菌分离的主要步骤，关系到能否成功分离到致病菌以及准确诊断疾病。

1.样品采集与保存的原则

（1）应选择具有典型病症的活体或濒临死亡的个体进行采集。

（2）采样工具必须做到无菌、无毒、清洁、干燥、无污染。

（3）样品采集过程中避免对病原分析结果有影响的因素发生。

（4）样品采集的数量与方法应根据具体养殖品种和訚病的临床症状表现而定。

2.样品采集方法

用于细菌感染诊断的水生动物样品的采集，首先要制定详细的采样方案，包括采样地点、对象、数量、采样时间、检测项目等。根据采样方案进行准备采样用品，包括采样工具、容器、辅助设施、记录表等。样品采集中，根据发病池塘的分布、疾病发生与发展的不同过程等进行设置采样点与采样数量。样品一般选择水生动物整体，带回实验室进行取样操作。对于特殊样品，可无菌操作采集合适的器官和组织保存。采集数量一般为10～20尾（只）。对于外表健康无临床症状的水生动物，原则上每批次应采集150尾（只）。

3.样品的保存与运输

样品采集后应立即进行封样，运回实验室。活体包装袋加水并充氧转运，必要时加冰。死亡个体或组织器官封装后，4℃保存下运输，在2小时内进行病原细菌分离。包装容器应完整，具有一定的抗压、抗震性，不对样品造成污染和伤害。

三、水生动物检测样品采集注意事项

水产动物病样的采集和保存，是保证水生动物病原微生物分离、鉴定和保存的关键之一病样采集和保存现场的目的主要可分为两大类：一是采样水生动物的病原生物、水生动物发病组织和材料，送检到实验室作进一步检测，以查明疾病暴发流行的原因。二通过收集、保存病原微生物，以对病原体作进一步的研究，如研究水生动物的发病趋势、病原微生物的耐药性、确定治疗方案等。视对象和样品种类不同，采样具有其特殊性，但应该注意以下事项：

1.注意生物安全

虽然人鱼共患的疾病较少，但仍一些疾病可能是人鱼共患的疾病，如链球菌，因此采样时应注意个人防护，如采样时要戴手套，取样完成后应及时洗手消毒等。同时取样后的患病水生动物应做好无害化处理，以防疾病的扩散和传播。

2.注意采样的代表性或针对性

水生动物发病后的采样，应考虑疾病危害的种类、发病的症状、发病时间、水质情况等具体情况制定采样计划，取样的部位应是病原微生物含量最多的部位，取样的数量应足够用于实验室检测。

3.注意采样时间和种类

一般原则是根据不同疾病的特点和临床表现，确定采样时间和标本种类。由于同一养殖水域，养殖的水生动物数量和种类较多，因此病料采集时，主要采集已经具有发病症状的水生动物，采样的样品以濒死或刚死亡的鱼为主。对水生动物细菌和真菌性疾病采样时，应尽量在急性发病期和使用抗菌药物之前采集标本，如果已使用抗生素，采样和分离培养最好加入相应的中和剂（中和水体和水生动物体内残存的抑菌物质），避免抗菌药物对细菌培养的干扰。作病毒分离和病毒抗原检测的标本，应在发病初期和急性期采样，最好在暴发和流行期内采取，此时病毒在体内大量繁殖，检出率高。

4.注意避免采样引入新的污染或者对微生物的杀灭因子

所有采样用具、容器需严格灭菌，并以无菌操作采样。对容器基本要求是选耐用材料制成，容器包装好后可防渗漏，能承受空中或地面运送过程中可能发生的温度和压力变化。对微生物样品，应避免采样时对微生物的杀灭作用和引入新的抑菌物质，如容器是否有消毒剂的残留，或使用刚烧灼未冷却的采样工具。并注意保护目的微生物，注意使用正确的采样液和加入中和剂。

5.样品标记

采集的水生动物病料应标明样品名称、采样地点、采样时间、采样者、患病水生动物的规格、病害的危害程度、用药记录、检测项目等。