血清中尿素氮含量实验

【实验目的】

1．了解血清尿素测定的原理和方法。

2．熟悉尿素测定的临床意义及正常值。

【实验原理】

尿素是蛋白质在体内代谢的终产物，血清尿素氮约占非蛋白氮的1／3～1／2。血清尿素含量的测定是临床上判定肾功能的重要指标。

测定血中尿素的方法很多，常用的有二乙酰一肟法和脲酶法。本实验采用的是二乙酰一肟法，此法灵敏度高，操作简便，呈色稳定，重复性好，故广为利用。

血液中的尿素在氨基硫脲（具有使呈色稳定的作用）存在下，与二乙酰一肟在强酸性条件下共热反应，生成红色化合物，对520nm波长的光具有特殊的吸收峰，因此其呈色深浅与尿素含量成正比。与同样处理的尿素标准液进行比色，即可求出血清中尿素的含量。

【实验器材】

分光光度计；离心机；三用水箱；采血针；吸血管及胶头；棉签；离心管；普通试管；具塞试管；移液管；血清。

【实验试剂】

1．二乙酰一肟－硫氨脲试剂　在1　000ml容量瓶中加入500ml蒸馏水，10g二乙酰一肟及0．3g硫氨脲，混合至完全溶解，用蒸馏水稀释到刻度。存于棕色瓶中，此溶液须每两个月配制一次。

2．砷酸混合液　200ml蒸馏水加到2　000ml锥形瓶中，将200ml浓硫酸慢慢加入，小心混匀，然后加入20g砷酸，在电炉上加热，搅拌混合至完全溶解。冷却后，加蒸馏水至2　000ml。在室温下，可长期保存。

3．尿素标准液（5mmol／L）　精确称取干燥的分析纯尿素150mg，溶解于400ml蒸馏水和0．2ml浓硫酸中，然后加蒸馏水至500ml。此溶液在室温下稳定。

【实验方法】

1．取3支试管做好标记，按附表18加入试剂：

附表18　二乙酰一肟法测定血清尿素加样表

混匀后，在沸水浴中煮12min，在冷水中冷却3～5min。用分光光度计在520nm的波长下，以空白管调零点，读取各管的光吸收值A（应在30min内比色完毕）。

2．计算：

【注意事项】

1．本法标准曲线的线性范围在尿素7mmol／L以内，过高须将样品稀释。

2．本法试剂单一，操作简便，但试剂具有毒性和腐蚀性，请注意安全。

3．溶血、黄疸及高脂血症的血清对本实验无干扰。

【临床意义】

正常值参看范围：2．86～7．14mmol／L

1．血液尿素浓度增高分生理性和病理性因素两方面。

（1）生理因素：高蛋白饮食引起血清尿素浓度增高。

（2）病理因素：①肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。②肾性：肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等影响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。③肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。

2．血尿素浓度降低除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者外，常见于肝功能衰竭患者。

（苏　燕）