三疣梭子蟹微卫星标记与生长相关性状的相关性分析

遗传改良的快速方法是找到控制经济性状的主效基因或遗传标记，进而通过分子标记辅助选择（Marker-Assisted Selection，MAS）缩短世代间隔，提高新品种选择的效率和准确性。进行分子标记辅助选择，首先要实现标记和性状的连锁分析或QTL定位。微卫星是近年来发展迅速的分子标记，在水产动物的研究中应用广泛（Chistiakovet al，2008；Guyomardet al，2006），鱼类育种中借助微卫星进行性状连锁分析或QTL定位已有报道（Cnaani et al，2003；Rodriguez et al，2004；孙新等，2008；李建林等，2009）。目前，已有微卫星标记应用于三疣梭子蟹遗传多样性分析（李晓萍等，2010）、家系鉴定（刘磊等，2010）、遗传连锁图谱的构建（罗云等，2010）等方面，但未实现QTL定位和连锁分析。本实验选择35个微卫星标记，探讨这些标记与三疣梭子蟹生长相关性状（全甲宽、甲宽、甲长、体高、体重、第Ⅱ侧齿间距、第Ⅰ步足长节长、大螯长节长）之间的相关性，试图找到与这些性状有关的标记位点，为QTL定位和MAS提供数据支持。

2007年从三疣梭子蟹海州湾野生群体中挑选个体大，发育良好的30只未交尾雌蟹，10只未交尾雄蟹，进行雌雄比3：1交配。2008年4月培育出F1代家系。2009年8月从F1代家系中挑选符合上述条件的雌、雄蟹。按照雌雄比3：1的方式进行家系内交配，越冬后于2010年4月培育出F2代家系，家系父母本保存。同年7月上旬，当F2代幼蟹长至100日龄时（平均体质量5.100.6　0.5 g），采用地笼捕获法，随机取一个家系的110个个体，生长性状测量完毕后编号，取新鲜大螯部肌肉，样品收集后保存于280 ℃超低温冰箱中。

提取基因组DNA，进行PCR扩增（微卫星引物序列见表13），产物在SDS-PAGE中分离，银染法显色，定影。凝胶干燥后扫描仪扫描记录凝胶图像。利用POPGENE（Version 3.2）软件进行数据处理、遗传多样性分析，计算等位基因数（Numbers of the alleles，Na），有效等位基因数（Numbers of the effective alleles，Ne），Hardy-Weinberg平衡检验（P值），期望杂合度（Expected heterozygosity，He）及观测杂合度（Observed heterozygosity，Ho）。参照Botstein等（1980）的方法计算多态性信息含量（Polymorphism Information Content，PIC）：

式中，Pi、Pj分别为群体中第i和第j个等位基因频率，n为等位基因数。

表13三疣梭子蟹微卫星引物信息

续表

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用SAS 9.1软件中的一般线性模型（GLM）对三疣梭子蟹生长相关性状与35个微卫星标记相关性进行分析。