【摘要】：18．4．1 转基因动物SOD的制备方法目前，从动物血液中提取纯化SOD已有多种成熟的方法，基本工艺流程大多为：血液预处理，洗涤红细胞和溶血；去除大部分杂蛋白得SOD粗酶液；层析分离得到高纯度的SOD。Hansson等于1994年将hEC－SOD基因克隆进鼠的胚胎，筛选出了在乳汁中表达hEC－SOD的鼠，整个转基因过程分为以下四步：动物SOD基因克隆；转SOD基因所用载体；动物转SOD基因手段；转基因阳性克性筛选。
转基因动物的制备方法_超氧化物歧化酶
18．4．1 转基因动物SOD的制备方法
目前，从动物血液中提取纯化SOD已有多种成熟的方法（详见第14章），基本工艺流程大多为：血液预处理，洗涤红细胞和溶血；去除大部分杂蛋白得SOD粗酶液；层析分离得到高纯度的SOD。去除大部分杂蛋白得SOD粗酶液的过程有多种方法可以选择：盐析、热变性、超滤及甲醇处理等。盐析处理即用硫酸铵（或磷酸氢二钾）溶液进行了盐析；热变性处理是采用加热的方法去除杂蛋白（SOD热稳定性较好），常用的温度及作用时间为：55℃（15～30min），60℃（10～25min）及65℃（10～20min）。层析分离得到高纯度的SOD的过程也有其他一些成熟方法。饶欣欣等用抗原－抗体亲和层析法以螯合型Sepharose为固定相，利用铜离子和SOD多肽链中组氨酸的咪唑特异性结合，纯化了重组人铜锌、人铜锌和牛血铜锌超氧化物歧化酶用DEAE－Sepharose和Phenyl－Sepharose层析纯化了SOD，以水玻璃为原料制备了二氧化硅吸附剂，用来代替精制过程中的DEAE－纤维素纯化SOD。
哺乳动物细胞系统可对外源基因表达产物进行理想的修饰加工处理，并将活性的目的蛋白分泌至胞外，适宜于大分子糖蛋白的克隆和表达。Tibell等于1993年报道了hEC－SOD基因在CHO细胞中的表达，工程细胞成功地向培养基中分泌了hEC－SOD。Hansson等于1994年将hEC－SOD基因克隆进鼠的胚胎，筛选出了在乳汁中表达hEC－SOD的鼠，整个转基因过程分为以下四步：
（1）动物SOD基因克隆；
（2）转SOD基因所用载体；
（3）动物转SOD基因手段；
（4）转基因阳性克性筛选。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
