一、实验实训目的
掌握试管苗的茎段转接技术，进一步巩固无菌操作技能。
二、仪器及试剂
超净工作台及配套接种用具（无菌接种工具、酒精灯、酒精棉球、70%的酒精瓶、无菌培养皿、打火机等）。
三、试验材料
取培养大花蕙兰、马铃薯、铁皮石斛等试管苗，选择长势好、高度达5 cm以上的茎梢种苗或芽丛种苗。每个超净台配给2瓶种苗和事先做好的10瓶空白培养基。
四、实验实训操作步骤
（1）配制继代培养基并做好灭菌备用。
（2）接种前4 h对接种室进行熏蒸，每个超净台取10 mL左右的甲醛液装入瓶中，在超净台边加入5 g左右的高锰酸钾，立即放入超净台里；接种前20～30 min接通电源，打开紫外灯和风机。
（3）洗净双手，穿好专用实验服进入接种室，用酒精棉球擦拭双手、台面及接种工具等。
（4）将酒精灯放在距超净台边缘约30 cm正对胸前处，注意以后的操作都要在酒精灯的10 cm半径范围内完成。点燃酒精灯，对剪子和镊子过火，先从头至尾过火，然后对尖端反复过火；将种苗瓶放在灯前偏左处；将空白培养基瓶放在灯前偏右处；将接种用培养皿放在距超净台边缘约15 cm正对胸前处，以方便操作。
（5）打开原种瓶，对瓶口先外壁、后内壁过火。然后准备接种：先将种苗移到培养皿里。左手将培养瓶水平拿着，右手拿镊子夹一块分割好的大花蕙兰（马铃薯、铁皮石斛）材料送入瓶内，轻轻插入培养基上，再将瓶口置酒精灯火焰区烘烤数秒钟后，迅速盖上封口膜，绑好瓶口（每人接种10瓶）。操作期间应经常用70% 的酒精擦拭（或喷雾）工作台和双手；接种器械应反复在95% 的酒精中浸泡和在火焰（或干热灭菌器）上灭菌，以防止交叉污染。接好后，瓶口和封口膜均要过火，扎口。如果技能熟练的话，可用悬接法，用镊子夹住试管苗的顶端一节，拔出瓶口，剪断这一节，将茎段插入空白培养基中。对芽丛可提起一个芽丛的一个芽，用剪刀剪去其他部分，将单芽插入培养基里。
（6）接完一瓶原种后，可用酒精棉球擦拭双手，弃去含废弃物的培养皿，换用新的无菌培养皿，以防交叉感染。
（7）接完10瓶种苗后，写好标签，移出超净台，置于塑料筐里，再接下一批。
（8）接种完毕，熄灭酒精灯，盖上酒精瓶，收拾净超净台面，先把种苗瓶移出，然后将废物皿、空原种瓶、培养皿、接种工具等移出放到塑料筐里，带出接种室，清洗干净。
（9）接种后的培养物转移到培养室进行培养。3 d后，经常检查污染情况，及时清除培养瓶。
五、作 业
（1）将本次实验实训内容整理成实验实训报告。
（2）观察并记录转接后植物的生长情况、污染率等。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
