免疫透射比浊实验

实验十二　免疫透射比浊实验

免疫透射比浊实验是免疫浊度测定的一种，是将液相沉淀反应与光学仪器和计算机分析系统相结合的一项分析技术。

实验目的

掌握免疫透射比浊实验的原理，基本方法及临床应用（以检测血清IgG含量为例）。

实验原理

抗原抗体在适当缓冲液中相互作用时，若抗体恒定，复合物随抗原量增加而增加，反应液浊度亦增加，一定范围内，反应液浊度与抗原抗体复合物的量呈现函数关系，因而可根据反应液浊度计算待检抗原的量。

实验材料

（1）待检血清。

（2）抗人IgG血清、参考血清、0．01mol/L pH值为7．4的磷酸盐缓冲液（PBS）。

（3）样本稀释液：0．01mol/L的磷酸盐缓冲液（pH值为7．4）中含0．15mol/L氯化钠，40g/LPEG－6000及适量表面活性剂。

（4）吸管、微量移液器、小试管、恒温箱、全自动生化分析仪等。

实验方法

（1）抗人IgG血清与样本稀释液以1∶9比例混合稀释成抗体应用液。

（2）按表3－3加样。

表3－3　免疫透射比浊实验加样量（单位：μL）

注：混匀，37℃条件下放置10min，340nm波长以抗体空白管调零，按终点法读取各管光密度值（A值）。

实验结果

可根据公式计算：待检血清管浓度＝（待检血清管A值/参考血清管A值）×参考血清管浓度。

也可将参考血清稀释成不同浓度的标准管，以相同实验步骤读取各管光密度值，以光密度对浓度进行回归处理，按y＝a＋bx＋cx²＋dx³的3次方程回归曲线进行定标，制作参考校正曲线。以待检血清管光密度值，代入曲线读取待检血清的IgG含量。

注意事项

（1）待检血清可适当稀释后再进行检测。

（2）若制定参考校正曲线，需与待检样品检测同时进行。

思考题

（1）当抗原过量时，检测结果会如何？为什么？

（2）免疫透射比浊实验的影响因素有哪些？如何克服？