1949年，Murray Llewellyn Barr（1908～1995）加拿大解剖学家、遗传学家在雌猫神经元细胞核发现一种浓缩小体，在雄猫中见不到。后来在其他雌性哺乳动物也发现这种显示性别差异的结构，称为性染色质（X染色质或Barr小体）。
一、目的要求
（1）掌握X染色质标本的制备方法。
（2）熟悉X染色质的形态特征和计数方法。
（3）熟悉性染色质检查的临床意义。
（4）了解Y染色质的形态特征及制备方法。
二、实验原理
女性的两条X染色体胚胎初期一条保持代谢活性，与常染色体一起进行正常活动，另一条DNA复制较晚，呈异固缩状态，形成X染色质（又称X小体或Barr小体），即女性的染色质，存在于间期核内X染色质的数目总是比X染色体的数目少1，可被特异的染料染色呈深色而显示出来，代表失活了的X染色体。正常女性有2条X染色体，因此只有1个X染色质；若有3条X染色体，就会有2个X染色质，以此类推。正常男性只有1条X染色体，所以没有X染色质。X染色体数＝X染色质数＋1。
男性间期细胞核中，在荧光显微镜下可见核内有一个约0.3μm大小的荧光小体，系Y染色体的长臂末端被荧光染料着色而成，称为Y染色质。性染色质的检查可作为性别测定的依据和性染色体数目异常的一种辅助诊断方法。
三、实验用品
（1）材料：正常男、女性口腔黏膜细胞和发根毛囊细胞。
（2）器材与仪器：显微镜、荧光光源或荧光显微镜、牙签、染色缸、载玻片、擦镜纸。
（3）试剂：硫堇染液、固定液（甲醇∶冰醋酸＝3∶1）、4%醋酸、7.5mol/L盐酸、0.5%盐酸喹吖因染液。
四、内容与方法
（一）X染色质制片及观察
1.女性口腔颊部黏膜上皮细胞制片
（1）取材：受检女性用清水漱口3次，将口腔内杂物漱出。然后用牙签的钝面刮取口腔颊部黏膜上皮细胞。
（2）涂片：将刮取的上皮细胞，均匀涂在洁净的载玻片上，并用记号笔标上记号，以识别标本正反面。
（3）固定：将涂片置入95%乙醇溶液内固定20～30min，用蒸馏水洗涤3次，取出晾干。
（4）染色：将固定后的标本浸入蒸馏水中片刻，再浸入30℃的5mol/L的HCl溶液中水解20min，取出用蒸馏水洗3次（换水）。待干后加入硫堇染液染色30min。再用蒸馏水漂洗3次，稍干后盖上盖玻片，用手指轻轻压，用吸水纸吸去盖玻片周围的余液。
（5）镜检：在低倍镜下，可见口腔上皮细胞核为圆形或卵圆形，染成紫蓝色，胞质不着色。换油镜，选择典型的可计数细胞进一步观察。在可计数细胞内，仔细寻找X染色质。X染色质的特征是：染色深，轮廓清晰，呈平凸形、圆形、扁平形或三角形，大小约1.5μm，多位于核膜内侧缘（图17－1）。统计X染色质的阳性率（至少应观察100个细胞）。
图17－1 女性口腔黏膜X染色质示意图
2.女性发根毛囊细胞制片
（1）取材：拨下受检者的头发2～3根。
（2）制片：将根部带有完整毛囊组织的部分置于载玻片中央，加1滴4%醋酸处理5～10min软化毛囊，再用牙签刮下毛囊组织，弃去发干，均匀涂布细胞，干燥。
（3）固定：用固定液固定15min，晾干，再滴入或浸入7.5mol/L盐酸中水解10min，用自来水冲洗。
（4）硫堇工作液染色10min，水冲洗。
（5）镜检：所计数细胞要完整，无缺损，无皱褶，核染色均匀。
（二）Y染色质标本制备及观察
（1）男性口腔黏膜细胞或发根毛囊细胞Y染色质标本制片：与上述X染色质标本制备相同，但所用的染料不同。制备Y染色质标本片晾干后，可将片投入0.5%盐酸喹吖因中染色6min，取出在蒸馏水中放置10min，以除去多余的染料颗粒。不等干，盖上玻片，观察（图17－2）。
图17－2 男性口腔黏膜Y染色质
（2）观察与计数：将标本片置荧光显微镜下观察计数。用高倍镜或油镜观察均可，但室内光线较暗为好。Y染色质在镜下的特点是在核内出现一个较强的荧光点，闪烁如星星，直径约0.25μm，一般位于核的中部或边缘。每份标本至少计数50个细胞Y染色质出现率。
Y染色质在口腔黏膜细胞的出现率一般为20%～30%。但由于个体的差异，出现率常有较大的不同。
五、注意事项
（1）荧光染料要新鲜配制，现配现用。
（2）染好的标本片不要久放，一般不超过2h。
（3）涂布细胞均匀，无重叠。
六、作业与思考题
（1）在油镜下分析计数50个细胞，并计算X染色质的出现率。
（2）绘制一口腔黏膜细胞的X染色质图。
（3）检查X染色质和Y染色质有何临床意义？
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
