六、其他生化反应试验
(一)克氏双糖铁(KIA)试验
1．原理 KIA培养基中除含基础营养成分外，还有乳糖、葡萄糖、枸橼酸铵铁、酚红指示剂等。其中乳糖的浓度为葡萄糖的10倍，若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，则培养基中的葡萄糖被分解后只能产生少量的酸，在最初培养的8～11 h内，这些酸使培养基的底层和斜面变黄色。但连续培养数小时后，在细菌和氧的作用下，培养基斜面中的氨基酸发生降解，释放氨类，中和斜面部分的酸，培养18～24 h后，整个斜面转变成碱性，使斜面变成红色。在培养基深层，由于氨基酸的降解作用不足以中和所形成的酸，故仍呈黄色。因此，KIA斜面呈碱性，深层呈酸性反应，表明该菌只分解葡萄糖而不分解乳糖。若细菌分解乳糖则产生大量的酸，这些酸能中和斜面产生的碱，使整个培养基呈黄色。若细菌能分解培养基中含硫氨基酸，则可产生H2 S，H2 S与培养基中的枸橼酸铵铁起反应，产生不溶性的黑色硫化亚铁沉淀。
2．方法 用接种针挑取待检细菌，先在KIA斜面划线，然后穿刺接种深层(距管底3～5 mm为宜)。35℃培养18～24 h，观察结果。常见的KIA反应结果有如下几种:①斜面碱性/底层碱性:不发酵糖类，见于不发酵菌，如铜绿假单胞菌。②斜面碱性/底层酸性:不发酵乳糖，发酵葡萄糖，如志贺菌。③斜面碱性/底层酸性(黑色):不发酵乳糖，发酵葡萄糖、产H2 S，如沙门菌。④斜面酸性/底层酸性:发酵乳糖，发酵葡萄糖，如大肠埃希菌(彩图13)。
3．应用 KIA主要用于肠杆菌科细菌的鉴定和鉴别。
(二)动力靛基质脲酶(M IU)试验
1．原理 M IU试验是动力、靛基质和脲酶综合在一起的试验。M IU培养基中含有胰蛋白胨、磷酸氢二钾、葡萄糖、尿素、酚红指示剂和0．4%的琼脂。培养基为半固体性状，可观察细菌的动力;胰蛋白胨中富含色氨酸，产生色氨酸酶的细菌可以水解色氨酸形成靛基质，当加入靛基质试剂后可形成玫瑰靛基质;产生尿素酶的细菌分解培养基中的尿素产碱，使酚红指示剂呈碱性变色。
2．方法 取待检细菌穿刺接种到M IU培养基，35℃培养18～24 h后观察结果。接种线变模糊，培养基变混浊为动力试验阳性(彩图14);加入靛基质试剂后，试剂与培养基的接触界面成玫瑰红色为靛基质试验阳性;培养基全部变成桃红色为脲酶试验阳性。
3．应用 M IU试验常与KIA试验共同用于肠杆菌科细菌的鉴定。
(谢锦华)
思考题
1．与医学有关的细菌代谢产物有哪些?
2．细菌生化反应试验主要包括哪几大类?
3．试指出金黄色葡萄球菌、A群链球菌、B群链球菌、D群链球菌、肺炎链球菌最有代表性的鉴定试验。
4．杆菌肽试验阳性、凝固酶试验阳性、奥普托欣敏感试验阳性、CAMP试验阳性、IMViC试验结果为++－－、IMViC试验结果为－－++、快速分解尿素分别是哪些细菌的重要生化反应特征?
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