离体器官水平实验

第二节　离体器官水平实验

离体器官实验是利用动物的离体组织、器官，置于一定的存活条件下（如温度、营养成分、氧气、水、pH值、离子浓度、渗透压等）进行观察的一种实验方法。离体器官由于脱离了在体时的神经、体液等因素的影响，一方面能比较直接地反应药物或处理因素对该器官组织的直接作用，使实验对象更加容易控制和均一化，同时所用方法相对比较简单，也不需要很复杂的仪器设备；另一方面，也正是因为离体器官处于模拟条件下，与整体的实际情况有较大的差别，其结果势必与在体的真实变化有一定差距，因此离体器官实验仅能作为整体研究的补充和参考。以下仅介绍Langendorff离体大鼠心脏、家兔离体血管条的制备方法。

一、Langendorff离体大鼠心脏的制备

1.主要步骤

（1）麻醉与抗凝：腹腔注射戊巴比妥钠（30mg/kg）、肝素（250U/kg）。

（2）手术：麻醉后，将大鼠置于小动物手术操作盘上，用大头针或胶布固定四肢，手术区备皮。于剑突下沿肋缘下打开腹壁，剪开膈肌，沿两侧腋前线剪开胸壁并向头侧上翻，暴露心脏并于心脏根部保留主动脉3～4mm，剪断上下腔静脉、肺动脉、主动脉以及其他结缔组织，摘下心脏并立即置入预冷且通有95%O₂和5%CO₂的Krebs-Henseleit（K-H）液中（NaCl 133mmol/L、KCl 4.75mmol/L、MgCl₂1.25mmol/L、CaCl₂1.5mmol/L、NaHCO₃25mmol/L、葡萄糖溶液11.1mmol/L，pH值7.4）。轻轻挤压心脏，排除心腔内的残留血液。

（3）主动脉插管：将主动脉固定于Langendorff离体心脏灌流装置（图21-7）的灌注管口。用预先氧平衡的37℃K-H液以5.8kPa的压力行心脏逆行灌注，心脏跳动后在左心耳处剪一小口，将尖端带有乳胶水囊的测压导管经二间瓣插入左心室，并连接压力换能器系统，调节水囊压至5～6mmHg，并记录左心室内压（LVP）、左室内压最大变化率（±dp/dt_max）和左室舒张末期压（LVEDP）。

图21-7　Langendorff离体心脏灌流装置

（4）灌流平衡：离体心脏连接灌流装置后，用预先氧平衡的37℃K-H液以5.8kPa压力行心脏逆行灌流30min后，进行后续实验（如停灌后再灌以模拟在体的缺血再灌注，或使用药物进行灌流以观察药物的作用等）。

2.注意事项

（1）分离心脏、连接灌流装置的速度要快，一般在2～3min内完成，以减轻由于心肌缺血、缺氧而引起的心肌损伤。

（2）温度要严格控制。

（3）K-H液必须为新鲜配制，注意要进行氧平衡。

（4）导管连接需在液体中（液面下）进行，避免空气进入而造成气体栓塞。

二、离体家兔血管条制备

1.基本步骤

（1）取家兔一只，雌雄均可，体重2～3kg。重物猛击头部致昏迷，迅速开胸，分离胸主动脉，分别于近心端和远心端在膈肌处剪断，置于预先通有95%O₂和5%CO₂混合气的37℃K-H液中，洗去血凝块。

（2）将主动脉移至另一新的盛有K-H液的培养皿中，将血管条细心套入一细玻璃棒上，去除血管周围的结缔组织，然后用眼科剪刀将主动脉作螺旋形剪开，剪成宽3mm、长3mm的螺旋形条片。将血管螺旋条的两端用线结扎备用。

2.注意事项

（1）取胸主动脉时应迅速，除去血管周围结缔组织时要细心，切勿剪破血管。

（2）操作时勿用力牵拉刺激标本，以免损伤标本。

（3）制备螺旋条时，细玻璃棒插入主动脉内的动作要轻柔。

（4）尽量保持血管内皮的完整性，血管条在空气中暴露时间不宜过长。

（中南大学湘雅医学院　王慷慨）