梯度洗脱装置

进行高效液相色谱分析时，通常选用两种洗脱方法，一种为等度洗脱(isocratic elution)，另一种为梯度洗脱(gradient elution)。等度洗脱即在样品组分的分析周期中，流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。而梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗脱，即在一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比。由于在进行多成分复杂样品的分离时，经常会碰到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分分离度太大，且出峰很晚和峰型较差等现象，因此，采用等度洗脱色谱分离时无法得到良好的分离效果，此时应该考虑用梯度洗脱方法进行分析。

在液相色谱中流速(压力)梯度和温度梯度效果不大，而且还会带来一些不利影响，因此，HPLC中通常所说的梯度洗脱是指流动相梯度，即在分离过程中改变流动相的组成或浓度，由于液相色谱中洗脱液的极性变化直接影响样品组分的保留值，因此梯度洗脱可改善复杂样品的分离度，缩短分析周期，改善峰形，甚至可提高分析的灵敏度。梯度洗脱装置可分为以下两种。

4.2.4.1　低压梯度洗脱装置

低压梯度又称作外梯度，该方法在输液泵前安装了一个比例阀，常压下洗脱液按预先规定的比例混合后，再由高压输液泵输入色谱柱中，所以也称作泵前混合。由于常压下液体混合往往容易形成气泡，所以低压梯度通常配置在线脱气装置。

4.2.4.2　高压梯度洗脱装置

高压梯度又称作内梯度，它是将溶剂经高压泵加压后再混合的梯度洗脱装置，一般只用于二元梯度，即用两个高压泵分别按设定的比例输送A和B两种溶液至混合器，混合器是在泵之后，即两种溶液在高压状态下进行混合(泵后混合)。该方法主要优点是，只要通过梯度程序控制器控制每台泵的输出，即能获得任意形式的梯度曲线，而且精密度高，易于自动化控制。