高效液相色谱及其联用技术

从20世纪初俄国植物学家茨维特(M.S.Tswett)提出经典液相色谱法后，色谱分析法在过去100多年中取得了飞速的发展。作为色谱分析方法的重要分支，高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)是20世纪60年代末发展起来的采用液体作为流动相的一种高效能色谱方法。该方法在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上，采用了微粒固定相技术，实现了高柱效的分离能力，并伴随高压输液泵和高灵敏度检测器的研制成功，高效液相色谱法进入了高速发展的阶段，其分析技术特点也决定了HPLC的独特优势:①分离效能高:高效微粒固定相填料的使用大大提高了HPLC的分离效能，其柱效可达5×103～3×104块/m理论塔板数，远高于气相色谱填充柱的柱效(103块/m理论塔板数);②分析速度快:与经典液相色谱相比，HPLC法采用高压输液泵进行流动相的传输，缩短了样品的分析时间，通常几分钟至几十分钟可完成一个样品的分析，而超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC)的成功研发则进一步缩短了传统HPLC的分析时间，即便复杂成分的样品一般也可在几分钟内完成分析;③检测灵敏度高:高效液相色谱常用的紫外检测器的最小检测限可达10－9 g，荧光检测器最小检测限可达10－12 g，而高效液相色谱与质谱联用，检测灵敏度还将进一步提高;④选择性高:HPLC法不仅可以分析不同类型的有机物及其同分异构体，还可分析在性质上极为相似的旋光异构体;⑤应用范围广:与气相色谱法相比，HPLC法不受试样挥发性和热稳定性的限制，对于大多数的有机化合物都具有良好的分离和分析能力;⑥与气相色谱法相比，HPLC法不需要高柱温，一般在室温下即可分析。基于上述优点，HPLC及其各种联用技术已经逐渐成为体内药物分析领域最重要的分析手段之一。