在病原微生物鉴定中的应用

病毒、细菌等病原微生物感染机体后,不仅在机体内表达自身编码蛋白,而且能刺激机体产生相应抗体,免疫组织化学技术可检测出这两类蛋白。这不仅可增加病原微生物检测的灵敏性,同时还可反映机体对病原微生物的反应状态。免疫组织化学方法还可明确病原微生物抗原,如巨细胞病毒(CMV)、人乳头状瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)、乙型肝炎病毒(HBV)、衣原体、结核杆菌、大肠埃希菌、幽门螺杆菌等的所在部位及数量。

附:免疫组织化学染色的常用抗体

(引自人民军医出版社《临床技术操作规范病理学分册》)

(一)上皮源性标记物

1.一般性标记物 主要有上皮细胞膜抗原(EMA)和细胞角蛋白(CK),后者又有许多亚型,如:CK5/6;CK7;CK8;CK10/13;CK18;CK19;CK20等。

2.特异性和(或)相对特异性标记物 这类标记物很多,临床常用的有:癌胚抗原(CEA,标记胃癌、大肠癌)、肿瘤相关黏液抗原(CA242,标记胰腺癌、大肠癌)、甲状腺球蛋白(TG,标记甲状腺癌)、前列腺特异性抗原(PSA,标记前列腺癌)、前列腺特异性酸性磷酸酶(PSAP,标记前列腺癌)、甲胎蛋白(AFP,标记肝癌、内胚窦癌)、β-绒毛膜促性腺激素(β-HCG,标记胎盘滋养层细胞肿瘤、生殖细胞肿瘤)、CA125(卵巢癌)等。

(二)间叶源性标记物

间叶源性标记物中用的最多的是波形蛋白(vimentin,Vim)。

(三)肌源性标记物

肌源性标记物临床病理用的也较多,主要有结蛋白(desmin,Des)、肌动蛋白(actin)、平滑肌肌动蛋白(SMA)、肌特异性肌动蛋白(MSA)、肌球蛋白(myosin)、肌红蛋白(myoglobin,MG)、肌浆蛋白(myogen)、肌调节蛋白(yoD1)等。

(四)血管源性标记物

血管源性标记物临床病理常用的有CD31、第8因子相关抗原(FⅧRag)、CD34、UEA-1、BNH9等。

(五)组织细胞源性标记物

与组织细胞相关的标记物多为酶类,常用的有溶菌酶(lysozyme)、CD68/KP-1、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、α1-抗胰糜蛋白酶(α1-ACT)、Mac387等。

(六)淋巴造血组织源性标记物

1.全淋巴细胞 常用的有白细胞共同抗原(CD45/LCA)、末端脱氧核苷酸转移酶(Td T)、CD30/Ki-1等。

2.全B细胞 常用的有Igκ、Igλ、CD20/L26、CD79α、B淋巴细胞抗原(BLA36)等。

3.B细胞亚型 主要用于B淋巴细胞分类,常用的有CD10、标记滤泡性树突状细胞的CD21和CD35、CD23及CD38等。

4.全T细胞 常用的有CD3、CD5、CD43、CD45RO/UCHL-1。

5.T细胞亚型 主要用于T淋巴细胞分类,常用的有CD1a、CD4、CD8等。

6.NK细胞 常用的有CD56、CD57/Leu-7、CD16/Leu-11等。

7.粒细胞和单核巨噬细胞 常用的有CD11c/Leu M5、CD15/Leu M5、溶菌酶(lysozyme)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、α1-抗胰糜蛋白酶(α1-ACT)、CD68、S-100蛋白等。淋巴造血组织源性标记物另外还有一些,如尤因肉瘤标记物(CD99)、间变性淋巴瘤激酶(ALK-1)、HLA-DR、Bcl-2、Bcl-6、Bcl-10、Ki-67、周期素D1(cyclin D1)、CD25、CD34等。

(七)神经源性标记物

常用的神经源性标记物有S-100蛋白、神经特异性烯醇化酶(NSE)、Leu7、神经微丝蛋白(neurofilament,NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等。

(八)神经内分泌源性标记物

1.激素类标记物 这类标记物有儿茶酚胺(CA)、5-羟色胺(5-HT)、生长激素(GH)、催乳素(PRL)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促甲状腺素(TSH)、促滤泡素(FSH)、促黄体素(LH)、甲状腺球蛋白(TG)、降钙素(CT)、甲状旁腺素(PTH)、胰岛素(insulin)、胰高血糖素(glucagon)、舒血管肠肽(VIP)、生长抑素(somatostatin)、胰多肽(PP)、胃泌素(gastrin)等。

2.非激素标记物 这类标记物常用的有神经元特异性烯醇化酶(NSE)、嗜铬素A (Cg A)、突触素(SY)等。

3.激素受体 常用的有雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、雄激素受体(AR)等。

(九)细胞增殖相关蛋白

最常用的是增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67。

(十)黑色素标记物

常用的是HMB45与S-100蛋白。

(十一)癌基因和(或)抑癌基因产物

最常用的有bcl-2、Her-2、P53、P16、nm23、Rb等。

(十二)病原体标记物

常用的有分枝杆菌(mycobacterium)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBc Ag)、人乳头状瘤病毒(HPV)、人类T细胞白血病病毒(HTLV-1)、EB病毒等。

(李　梅　吕伟朋)

思考题

1.简述免疫组织化学染色机制。

2.常用的抗原修复方法有哪些?

3.简述常规免疫组织化学染色的过程。