形态学检查

4．1．1　病毒的分离与鉴定

对于难培养的肠道腺病毒，可以从患者粪便标本中粗提后，经电子显微镜或免疫电镜观察。这其中又包括两个步骤。

4．1．1．1　分离培养

标本应尽早从感染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物，粪便和尿液等，加抗生素处理过夜，离心取上清接种敏感细胞，37℃孵育后可观察到典型CPE，即细胞变圆、团聚、有拉丝现象，最突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。

4．1．1．2　病毒鉴定

用荧光标记的抗六邻体抗体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒，也可用血凝抑制（hemoagglutination inhibition，HI）试验或中和试验（neutralization test，NT）检测属和组特异性抗原，并鉴定病毒的血清型。

4．1．2　中和试验检测腺病毒方法

中和试验可以在患者血清中检出抗体，并可以鉴定病毒型别，是以前检测病毒分型的标准方法。但是由于中和试验操作步骤烦琐、耗时耗力，而且腺病毒有些型别之间存在交叉反应，会引起中和试验的不精确，故现在临床上几乎不用。但其作为经典方法在病毒鉴定中起着重要的作用，许多新的检测方法都要以之为标准来进行比较。

4．1．2．1　检测原理

中和试验是病毒血清学试验中常用的一种抗原－抗体反应，用以测定人或动物血清中和抗原、抑制病毒感染的生物效应，是反映机体抗特定病毒感染能力最可靠的方法。中和抗体是指能与病毒结合并使之失去感染力的抗体，主要是IgG。特异性的抗病毒免疫血清（中和抗体）与病毒作用，能够破坏病毒表面的受体作用点，抑制病毒对敏感宿主的吸附、穿入和脱壳，从而阻止病毒的繁殖，使病毒失去感染能力。

4．1．2．2　检测过程

细胞培养中和试验法，一般多采用稀释血清、固定病毒量的方法，以抑制50%病毒发生反应的血清最高稀释度作为中和抗体效价。用HeLa或Hep－2细胞按常规方法传代培养，然后测定其半数组织培养感染剂量（50%tissue culture infective dose，TCID50）。

中和试验前需要先进行病毒的滴定，选出病毒接种的浓度，通常用使半数细胞孔有病变的病毒稀释度倒数的对数来表示。测定步骤如下：

取病毒阳性细胞管冻融3次，2000转／分钟离心10分钟，吸取上清，加Eagle液10倍系列稀释为10－8～10－1病毒液，以每孔25μl加入细胞板内，每稀释度做4个重复。每孔加细胞悬液25μl，同样设细胞对照（25μl稀释液＋25μl细胞悬液），37℃培养7天，观察细胞病变。计算病毒株的TCID50。

进行中和试验：受检血清经56℃、30分钟灭活处理后，用培养液做4倍稀释，将各稀释血清与等量的100倍TCID50病毒混合，37℃水浴1～3小时，每份标本感染2个细胞孔，37℃静置培养，同时设病毒正常细胞对照。根据细胞病变结果，判定中和效价。

4．1．2．3　结果判定

以病毒对照管呈现＋＋＋＋病变时判断结果，以完全抑制细胞病变为终点。若细胞出现病变，表示病毒没有被中和；反之，如不出现病变，表示病毒被抗体中和。以能保护50%或50%以上细胞孔不出现病变的血清稀释度为中和抗体效价。

4．1．2．4　临床意义

此方法可用于对腺病毒进行型别鉴定，也可用于测定患者血清中的中和抗体水平，评估机体抗特定型别腺病毒感染的能力。