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多聚合酶链反应法检测

时间:2022-03-26 理论教育 版权反馈
【摘要】:PCR是一种分子学水平的检测,通过DNA聚合酶链的作用,将DNA的某个成分片段进行扩增,方法简单、敏感、高效、特异和快速,是一种能在体外进行扩增DNA的技术。通俗地可以把PCR理解为由变性、退火和延伸3个基本反应步骤构成:①变性:指模板DNA的变性。模板DNA经加热至93℃左右达一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便与引物结合,为下一轮反应作准备;②退火:指模板DNA与引物的退火。

PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种分子学水平的检测,通过DNA聚合酶链的作用,将DNA的某个成分片段进行扩增,方法简单、敏感、高效、特异和快速,是一种能在体外进行扩增DNA的技术。通俗地可以把PCR理解为由变性、退火和延伸3个基本反应步骤构成:①变性:指模板DNA的变性。模板DNA经加热至93℃左右达一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便与引物结合,为下一轮反应作准备;②退火:指模板DNA与引物的退火。模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板和引物的结合物在TaqDNA聚合酶(在平端连接中起作用的一种引物酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的、与模板DNA链互补的半保留复制链。如此重复循环地进行变性、退火和延伸3个过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4min,2~3h就能将目的基因扩增放大几百万倍。

PCR在试管中进行,能在几小时内使极微量的特定核酸扩增百万倍(106~109),故又称基因扩增技术,其敏感性远远超过包括放射免疫在内的所有血清学检验方法,是目前世界上研究感染性疾病、遗传性疾病的早期诊断和癌细胞基因检测、基因突变的先进技术。对肿瘤基因的检测以及病毒、细菌等抗原的检测都有极高的敏感性和特异性。

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