结核分枝杆菌检验

【标本采集】

根据病变部位的不同可采取痰、胸腹水、尿、脑脊液、粪、分泌物及组织等。痰最好晨起深咳而得，取为中、后段。若培养，必须用灭菌容器，患者应停药1～2d。

【检验程序】

详见图31-9。

图31-9　结核分枝杆菌检验程序

【检验方法】

1.直接涂片　薄涂片、萋－尼氏（热染法）或Kinyoun（冷染法）抗酸染色法染色、镜检。厚涂片—染色—镜检，必须看30～50个视野，详见表31-4。

表31-4　结核分枝杆菌涂片及报告方法

2.集菌涂片

（1）沉淀集菌法：将标本用20g／L的NaOH消化，置37℃30min；或高压灭菌液化后，3　000r／min，离心30min，取沉渣涂片。

（2）漂浮集菌法：将标本用NS充分稀释，再加入汽油或二甲苯0.5～1ml，振荡15～30min后，吸取泡沫或油层接界部分涂片。二者均用抗酸染色、镜检、报告同直接涂片。

3.荧光显微镜检查法　制片同上。用金胺“O”染色，在荧光显微镜下分枝杆菌可以发出荧光。

4.培养　杂菌污染标本应行前处理。如用4%H2SO4处理20min，或40g／L的NaOH　30min，或1g／L的胰酶消化后，再用0.3%苯扎溴铵处理5min以液化和杀灭杂菌。取0.1ml接种于固体培养液（罗氏培养液、小川培养液或以琼脂为基础的7H10、7H11等培养液）。37℃培养，1周观察1次生长情况直到6～8周。根据初生时间、菌落形态以及是否产色素等特点，加以判断（表31-5）。

表31-5　结核分枝杆菌培养生长情况及报告方法

5.动物试验　多用于科研或特殊需要时。取处理过的标本或分离菌株的悬液接种豚鼠皮下（1ml）或小白鼠尾静脉（0.1ml），4～8周后剖检，观察肺、肝、脾及淋巴结等有无结核病变。必要时进行涂片、再培养。不同动物对分枝杆菌的感受性不同。