【目的】 掌握常用蛙手术器械的使用，学会损毁蛙（蟾蜍）脑和脊髓（双毁髓）的方法，学会蛙（蟾蜍）坐骨神经腓肠肌标本的制作。
【原理】 蛙类动物的基本生命活动和生理功能与哺乳类动物相似，而且其离体组织制作及生存条件均比较简单，因此常用其离体组织进行实验，尤其是利用其坐骨神经腓肠肌标本观察神经肌肉组织的兴奋性、刺激与反应的规律等方面的实验。
【材料】 蟾蜍或蛙；普通剪刀、手术剪、眼科镊、金属探针、玻璃分针、蛙板、蛙钉、细线、锌铜弓，任氏液。
【方法】
1.破坏脑、脊髓 取蛙（蟾蜍）1只，用清水冲洗。左手握住蛙（蟾蜍），用示指使头前俯。右手持探针由枕骨大孔处垂直刺入椎管（图4-1），然后将探针向前刺入颅腔内，左右搅动探针2～3次，捣毁脑组织。将探针退回至枕骨大孔，使针尖向尾端刺入椎管，转动探针，捣毁脊髓。脑和脊髓破坏完全的蛙（蟾蜍），其下颌呼吸运动消失，四肢完全松软，失去一切反射活动，否则表示脑和脊髓破坏不彻底，应重新破坏。
2.去除躯干上部及内脏 用粗剪刀在蛙（蟾蜍）颅骨后方剪断脊柱（图4-2）。左手握住脊柱，右手用粗剪刀沿脊柱两侧（注意避开坐骨神经）剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂（图4-3）。剪除全部躯干上部及内脏组织，留下脊柱和后肢。剪去尾骨及相连皮肤。
图4-1 毁蟾蜍脑脊髓
图4-2 剪断蟾蜍脊柱
3.剥皮 用手或圆头镊捏住脊柱的断端（注意避开脊柱两侧的神经），另一只手捏住其皮肤的边缘，向下剥去全部皮肤（图4-4）。将标本放在干净的任氏液中。洗净手和使用过的剪刀等器械。
4-3 剪除躯干上部及内脏
图4-4 剥去皮肤
4.分离两腿 镊子取出标本，腹侧向上，用粗剪刀沿中线将脊柱剪成左右两半（注意勿伤坐骨神经），再从耻骨联合中央剪开（注意避免剪刀偏向一侧）。将标本浸入盛有任氏液的培养皿中。
5.游离坐骨神经 用蛙钉或左手的两个手指将半侧标本绷直、固定。先在腹面用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经，然后在标本的背侧于股二头肌与半膜肌的缝内（图4-5A）将坐骨神经分离到腘窝。用粗剪刀将坐骨神经连同2～3节脊椎从脊柱上剪下来，持脊椎轻轻提起坐骨神经，用手术剪剪断其不支配腓肠肌的分支，将神经干完全游离直至腘窝后搭放在腓肠肌上。
6.游离股骨 用粗剪刀在膝关节稍上方剪去并刮净股骨周围肌肉，在股骨中、上1／3交界处剪断。
7.分离腓肠肌 分离跟腱，穿线结扎（图4-5B），并在跟腱的远侧端剪断，提起跟腱，将其与深面组织分离至膝关节。在膝关节下方剪断小腿骨。此时已经制成了坐骨神经—腓肠肌标本（图4-5C）。
【观察项目】
1.检查标本的完整性，神经、肌肉有无损伤，股骨是否保留一段。
2.检验标本兴奋性，用沾有任氏液的锌铜弓触及坐骨神经，如腓肠肌发生迅速而明显的收缩，说明标本的兴奋性良好。标本浸入盛有任氏液的培养皿中备用。
【注意事项】
1.正确理解医学实验中对动物的使用，珍惜实验动物。
2.神经干、肌肉应避免被蛙（蟾蜍）体表毒液污染，也应避免清水冲洗。
图4-5 腓肠肌坐骨神经标本
3.神经干应避免接触金属器械。
4.操作过程中不得用力牵拉神经干。
思考题
1.捣毁脊髓后的蟾蜍有何表现？
2.如何判断制备的标本是否具有活性？
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