弧菌科及其检验

（一）弧菌科和弧菌属

1．弧菌科 是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖、菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性细菌，它包括弧菌属、产气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属4个菌属。它们广泛分布于自然界，以水中最为多见。前三属细菌均可引起人类感染，发光杆菌属对人无致病性。可根据极端鞭毛、甘露醇、脂酶、生长需要NaCl、O129敏感五项试验将它们鉴别。

2．弧菌属 根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、耐盐性和致病性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型O1群霍乱弧菌；③非O1群霍乱弧菌；④其他弧菌（副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、创伤弧菌、麦氏弧菌和拟态弧菌）。对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。

（二）霍乱弧菌

1．生物学性状 本菌呈弧形或逗点状，无芽胞有普通菌毛和性菌毛，有些菌株有荚膜，菌体尾端有一鞭毛，运动活泼，悬滴镜检可见穿梭状或流星状运动，患者米泔水样粪便直接涂片可见弧菌排列呈“鱼群”状，需氧或兼性厌氧菌，营养要求不高，耐碱，常用pH 8．5的碱性蛋白胨水增菌培养，选择性培养基有硫代硫酸钠－枸橼酸盐－胆盐－蔗糖琼脂平板（TCBS），霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色；4号琼脂和庆大霉素琼脂平板，霍乱弧菌将碲离子还原成元素碲，形成灰褐色菌落；血平板上菌落较大，ElTor生物型可形成β溶血环。生化反应发酵蔗糖和甘露醇，氧化酶、明胶液化和吲哚试验、赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性。本属菌对热、干燥、酸等敏感，但耐碱力较强，可在水中存活20d，对庆大霉素耐药。

霍乱弧菌具有耐热的特异性O抗原和不耐热的非特异性H抗原，O抗原特异性高，具有群特异性和型特异性，是分群和分型的基础。根据O抗原的不同，分成O1群、非O1群（O2～O138，亦称不凝集性弧菌）和O139群等155个血清群霍乱弧菌，O139血清群与O1群抗血清无交叉反应，遗传学特征和毒力基因与O1群相似。O1群霍乱弧菌的菌体抗原由A、B、C三个抗原组成，根据其不同组合又分AB的小川型、AC的稻叶型和ABC的彦岛型三个血清型。O1群霍乱弧菌有古典生物型和ElTor生物型两种生物型。

2．微生物学检验 尽量在使用抗生素前采集标本，及时接种，如不能及时接种者，要接种于碱性蛋白胨水或文－腊二氏保存液或卡－布运送培养基等尽快送检，标本应密封并派专人送检。标本直接镜检：①动力观察，取患者米泔水样粪便制成悬滴片，观察细菌动力。②制动试验，将病人米泔水样粪便或6h的增菌液与霍乱多价“O”免疫血清混合，5min后做暗视野或悬滴法检查，菌体凝集成块，动力消失。③涂片染色，取病人标本直接涂片，分别用革兰染色及1∶10稀释复红染色，镜检观察有无革兰染色阴性呈鱼群状排列的弧菌。④荧光抗体染色（免疫荧光球法）、O1群抗原单克隆抗体凝集试验。PCR检测霍乱毒素CT可快速诊断霍乱弧菌感染。

标本经增菌后或直接接种霍乱弧菌选择性培养基，挑选可疑菌落进行鉴定，鉴定以血清学（玻片凝集）为主，结合菌落特征和菌体形态、生化反应作出判断。霍乱弧菌古典生物型和ElTor生物型的鉴别：可根据羊红细胞溶血、鸡红细胞凝集、VP试验、多黏菌素B敏感、噬菌体Ⅳ组裂解和噬菌体Ⅴ组裂解六项试验将它们鉴别，古典生物型为（－－－＋＋－），ElTor生物型为（＋／－＋＋－－＋）。

3．临床意义 霍乱弧菌O1群和O139群是霍乱的病原体，其致病因素包括霍乱毒素（cT）、鞭毛和菌毛，cT是目前已知的致泻毒素中最强烈的毒素。O2～O138群可引起人类胃肠炎。