通过对抗原抗体反应结果的观察、分析，可鉴定抗原或抗体；既可用已知抗原检测未知抗体，又可用已知抗体检测未知抗原。由于抗原物理性状的差异或参加反应的其他辅助成分的不同，可出现不同类型的反应，下面主要介绍几种常见的类型。
（一）凝集反应
细菌、细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集块，即凝集反应（agglutination reaction）。
1．直接凝集反应 直接凝集反应（direct agglutination reaction）是颗粒性抗原与相应抗体直接结合而出现的凝集现象。常用的方法有玻片法和试管法。
（1）玻片法：常用已知抗体检测未知抗原，此方法简便快捷，为定性试验，可用于菌种鉴定、分型及人红细胞ABO血型鉴定等。
（2）试管法：常用已知抗原检测待测血清中有无相应抗体及抗体的含量，为半定量试验，可辅助临床诊断及分析病情，如诊断伤寒和副伤寒的肥达反应（Widal’s test）。
2．间接凝集反应 将可溶性抗原吸附于与免疫无关的载体颗粒上，形成致敏颗粒，再与相应抗体进行反应，出现肉眼可见的凝集现象，称为间接凝集或被动凝集反应（indirect or passive agglutination reaction）。常用的载体颗粒有人的O型红细胞、绵羊或家兔红细胞、聚苯乙烯胶乳颗粒、活性炭颗粒等，而相应的凝集现象分别称为间接血细胞凝集、间接胶乳凝集和间接炭粒凝集反应等。
如将抗体吸附于载体颗粒上检测未知抗原，则称反向间接凝集反应（reverse indirect agglutination reaction）。由于病原体抗原比血清抗体出现的早，故可用于某些传染病，如钩体病、乙型肝炎或原发性肝癌的早期诊断。
抗球蛋白试验是另一种间接凝集试验，由Coombs于1945年建立，故又称Coombs试验。抗原刺激机体后，除可产生完全抗体外，也可产生不完全抗体，不完全抗体主要是IgG类抗体，与颗粒性抗原结合，不出现凝集反应。用人血清球蛋白免疫动物可制备抗球蛋白抗体。直接Coombs试验用于检测与Rh阳性红细胞结合的抗体，即将抗人球蛋白抗体直接加入待检的红细胞悬液中，出现凝集说明Rh阳性红细胞表面存在不完全抗体。间接Coombs试验用于检测血清中的游离抗体，取O型Rh阳性红细胞与待检血清反应，再加入抗人球蛋白抗体，出现凝集说明待检血清不完全抗体阳性。
3．间接凝集抑制试验 将可溶性抗原与相应抗体预先混合并充分作用后，再加入致敏颗粒，此时因抗体已被可溶性抗原结合，阻断了抗体再与致敏颗粒上抗原的结合，不再出现致敏颗粒的凝集现象，称为间接凝集抑制试验（indirect agglutination inhibition test）。临床常用的免疫妊娠试验（immune pregnancy test）即属此类。用绒毛膜促性腺激素致敏胶乳颗粒，实验时先将已知抗体与妊娠妇女尿混合反应，然后加入致敏颗粒，因妊娠妇女尿中的绒毛膜促性腺激素已与相应抗体结合，加入致敏颗粒后因无相应抗体的存在而不发生凝集反应，即胶乳凝集被孕妇尿中绒毛膜促性腺激素所抑制，表明尿中含有大量激素，为妊娠试验阳性；反之，若胶乳凝集不被抑制，则妊娠试验阴性（图19-1）。
（二）沉淀反应
图19-1 间接胶乳凝集抑制试验（妊娠试验）示意图
血清、细菌浸出液等可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在的条件下，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（precipitation reaction）。沉淀反应的种类很多，常用的有环状沉淀反应、絮状沉淀反应、免疫扩散试验及免疫电泳等。
1．环状沉淀反应 环状沉淀反应（ring precipitation reaction）是将已知抗体放入小口径玻璃管内，小心将已适当稀释的抗原溶液叠加于抗体表面，使两种溶液界面清晰。数分钟后，在抗原、抗体交界处出现白色沉淀环者为试验阳性。此法操作简便，常用于血迹鉴定、微生物分型等。
2．絮状沉淀反应 絮状沉淀反应（flocculation precipitation reaction）是指抗原与相应抗体在试管内或凹玻片上结合后，凝聚成絮状沉淀物，即为阳性反应。此法可用于检查梅毒的不加热反应素及毒素或抗毒素的含量。
3．琼脂扩散试验 琼脂扩散试验是在琼脂中进行的一种沉淀反应，又称免疫扩散试验。半固体琼脂凝胶作为网状支架，让可溶性抗原、抗体在网间扩散，适当比例的抗原、抗体相遇可形成白色沉淀线。依抗原、抗体一种成分扩散还是两种成分均扩散又分为单向、双向两种类型，如与电泳技术结合，又可衍生出火箭电泳、对流电泳、免疫电泳等多种方法。
（1）单向琼脂扩散试验与火箭电泳：两者均是将一定浓度的抗体均匀混入加热熔化的琼脂中，倾注于玻片上制成含抗体的琼脂板，打孔后加入待测抗原。其中，单向琼脂扩散试验（single agar diffusion test）的抗原由小孔向四周扩散，与琼脂中抗体相遇形成免疫复合物而沉积下来，形成乳白色的沉淀环，沉淀环直径与抗原浓度相关（图19-2）。而火箭电泳（rocket electrophoresis）是将琼脂板置于电场中，通电后抗原由负极向正极定向扩散，与板中抗体结合形成火箭形的沉淀峰，沉淀峰高度与抗原浓度成正比。故两者均为定量试验，常用于测定体液中各类免疫球蛋白、补体成分的含量。火箭电泳由于受电场力的作用，带负电荷较多的抗原可快速泳动与相应抗体结合而沉积，故需时较短。
（2）双向琼脂扩散与对流免疫电泳：双向琼脂扩散（double agar diffusion）是将抗原抗体同时在琼脂板上扩散，若抗原抗体相应且比例适当，则于两孔间结合形成乳白色沉淀线，由于一对相应的抗原抗体结合只能形成一条沉淀线，因此，可根据沉淀线的数目推断待测抗原中所含的抗原成分，还可根据沉淀线的吻合、相交或相切推断两种抗原是相同、不同或部分相同（图19-3）。
图19-2 单向琼脂扩散示意图
图19-3 双向琼脂扩散示意图
对流免疫电泳（counter immunoelectrophoresis）是在双向琼脂扩散的基础上加电泳，将抗原孔置负极端，抗体孔置正极端。由于抗原所带的负电荷较抗体多，且抗原分子质量小于抗体，在电场中抗原可克服电渗作用而从负极泳向正极；而抗体却克服不了电渗作用，反而从正极泳向负极，这样抗原与抗体形成对流，短时间内即相遇形成沉淀线，故实验所需时间甚短，敏感性亦较双向扩散高。
（3）免疫电泳：免疫电泳（immunoelectrophoresis）是一种对含有多种抗原成分的复合物进行抗原种类分析的方法。先将待测标本于琼脂小孔中进行电泳，使标本中迁移率不同的各种成分分开，再于琼脂板中央挖一横槽，加入已知抗体，让其自由扩散，已分离成区带的各抗原成分与扩散的相应抗体相遇，在两者比例合适处结合形成沉淀弧。可根据沉淀弧的数量、位置、弧形等对待测标本成分及性质进行分析。本法主要用于血清蛋白及抗体成分的分析。
（三）补体结合试验
补体结合试验（complement fixation test，CFT）是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素为指示系统，来观察有无抗原抗体反应的一种血清学试验。本试验共有5种成分参与，分为两个系统：指示系统和待测系统。试验时先让待测系统与补体作用然后加入指示系统。若待测系统有相应的抗原抗体形成的复合物，则可消耗补体，指示系统因无补体参与而无溶血现象，此即补体结合试验阳性。如待测标本中无抗原或抗体存在，待测系统无免疫复合物形成，当加入指示系统时，绵羊红细胞在溶血素和补体的作用下发生溶血，则补体结合试验阴性（图19-4）。临床常用于检测某些病毒、立克次体和螺旋体患者血清中的抗体，也可用于病毒的分型。
（四）免疫标记技术
免疫标记技术（immunolabelling technique）是用荧光素、放射性核素或酶等标记抗体或抗原，来检测相应的抗原或抗体，是目前应用较广的一种试验方法。免疫标记技术不仅大大提高了抗原抗体结合反应的敏感性，且与光镜或电镜技术相结合，可对待测物质精确定位，从而为基础及临床医学研究提供方便。本方法可用于定性、定量及定位检测。
图19-4 补体结合试验示意图
1．免疫荧光技术 免疫荧光技术（immunofluorescence technique）是用荧光素标记抗体或抗原，检测标本中有无相应抗原或抗体的方法。常用的荧光素有发绿色荧光的异硫氰酸荧光素（FITC）和发红色荧光的藻红蛋白（PE）等。常用的方法有：①直接法。将荧光抗体加到待测的细胞悬液、细胞涂片或组织切片上，抗原抗体反应后，洗去未结合的荧光抗体，于显微镜下观察，有荧光的部位即有相应抗原存在。此法可用于组织细胞中病毒、病原菌的检查。缺点是每查一种抗原，必须制备与其对应的荧光抗体，极不方便。②间接法。先将组织或细胞上的抗原与未标记的相应抗体（一抗）结合，充分洗涤后再加荧光标记的抗球蛋白抗体（二抗），观察结果同直接法。间接法比直接法敏感性高，且标记一种抗体可用于多种抗原、抗体的检测，使用较方便（图19-5）。免疫荧光技术已广泛应用于细菌、螺旋体、病毒性疾病的诊断，还可用于自身免疫性疾病中抗核抗体的检查。
2．放射免疫测定法 放射免疫测定法（radioimmunoassay，RIA）是用放射性核素标记抗原或抗体，与待测的抗体或抗原反应，通过测定抗原抗体结合物的放射活性来判断结果。本方法敏感性高，可进行超微量分析，但需使用特殊的仪器设备，且有一定的放射性危害。
图19-5 免疫荧光直接法与间接法原理示意图
3．免疫酶技术 免疫酶技术（immunoenzymatic technique）是用酶标记抗体或抗抗体进行抗原抗体反应的一种方法。其原理及操作程序基本与免疫荧光技术相似，不同的是用酶代替了荧光素。将酶标抗体与相应抗原结合，加入酶作用的底物及供氢体，可根据有无颜色及颜色的深浅来判断待测标本中抗原的含量。常用的酶为辣根过氧化物酶（HRP），底物为H2O2，供氢体有邻苯二胺（OPD）和四甲基联苯胺（TMB），反应后供氢体生成有色氧化型染料，前者呈橘黄色，后者呈蓝色。由于酶的催化效率高，加上抗原抗体反应的特异性，此法操作既简便又安全，已被临床广泛应用。近年来该技术发展迅速，已建立有酶联免疫吸附试验、酶联免疫电泳转移印迹试验、斑点免疫结合试验等，其中以酶联免疫吸附试验应用最为广泛。
酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）：简称酶标法，是一种既可检测抗原又可检测抗体的免疫酶技术，方法简便快速，适用于各基层单位。常用的方法有两种：①双抗体夹心法，是检测抗原最常用的方法。将抗体吸附于固相载体（常为聚苯乙烯板）上，加入待测的抗原溶液，如标本中有相应抗原，则与吸附的抗体结合，洗涤后再加酶标抗体（试验中所用抗体和酶标抗体需识别结合抗原上不同的表位）、酶作用的底物，使其产生显色反应，颜色的深浅代表标本中所含抗原的量。②间接法，是检测抗体最常用的方法。抗原先吸附于固相载体上，加入待测血清，如血清中含有相应抗体，则与载体上抗原结合成复合物，洗去未结合的抗体后，再加入酶标抗球蛋白抗体（抗抗体），洗涤后加入底物显色，用目测或酶标仪测定底物颜色的深浅，推测抗体的含量。常用的ELISA法操作步骤见图19-6。
图19-6 ELISA法图解
4．免疫胶体金技术 用胶体金标记抗体与组织或细胞标本中的抗原反应，借助显微镜观察颜色分布即可定位、定性测定组织或细胞中的抗原。胶体金技术发展较快，如胶体金斑点渗滤试验和胶体金斑点免疫层析试验，尤其是后者检测敏感度高，操作简单，时间短，1～2min即可出现结果，已应用于HCG和乙肝两对半的检测。
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