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测定常见的失控原因及处理

时间:2022-03-12 理论教育 版权反馈
【摘要】:主要预防措施是避免来自标本的血红蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白、肝素、一些激素和来自标本处理中的去垢剂、有机溶剂等的抑制作用。阴性质控样本常见的失控原因:主要为扩增产物的污染和(或)临床标本的核酸提取过程中发生的标本间的交叉污染。

阳性质控样本常见的失控原因:①核酸提取中的随机误差,如核酸提取中的丢失、有机溶剂去除不彻底、标本中扩增抑制物的残留等;②仪器的问题,如扩增仪孔间温度的不均一性、孔内温度与所示温度的不一致等;③试剂的问题,如Taq酶和(或)反转录酶的失活、探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。主要预防措施是避免来自标本的血红蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白、肝素、一些激素和来自标本处理中的去垢剂、有机溶剂等的抑制作用。建议:①纯化核酸时使用酚-氯仿提取、二氧化硅吸附可有效去除临床标本中自带的干扰,但不能消除提取过程中掺入的去垢剂和有机溶剂的干扰;②对临床标本采取双份测定,这样可以避免很多操作过程中的随机误差;③对于含有抑制物的标本,在靶核酸浓度足够高的情形下可对标本进行稀释后测定;④使用内质控(见本章前述)。

阴性质控样本常见的失控原因:主要为扩增产物的污染和(或)临床标本的核酸提取过程中发生的标本间的交叉污染。预防措施主要包括:①建立严格的实验室分区;②严格操作程序;③使用带滤芯的枪头;④使用“防污染”(含UNG)的PCR试剂;⑤避免治疗药物对实验的干扰,如结核杆菌、淋球菌患者经抗菌药物治疗后样本中病原体及核酸浓度均降低,PCR检测阳性率降低。

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