甘草酸单钾盐的制备

一、目的要求

1．了解天然小分子的一般提取分离工艺。

2．掌握甘草酸单钾盐的制备工艺。

二、实验原理

甘草酸是甘草中最主要的活性成分。特点是高甜度、低热能、安全无毒，起泡性和溶血作用很低，具有增溶、增加药物稳定性、提高生物利用度及降低毒副作用的功效。甘草酸的许多金属盐，人体可适当吸收，不易造成元素的积蓄中毒。因此常被用来配制成健脾开胃、止咳化痰、顺气止喘、治疗慢性肝炎、降低血脂的良药，同时还具有抗癌防癌、干扰素诱生剂及细胞免疫调节剂等功能。单钾盐的制备工艺如图3-5-1所示。

图3-5-1 单钾盐的制备工艺

三、仪器与试剂

紫外—可见分光光度计如图3-5-2所示。

图3-5-2 紫外—可见分光光度计

1．仪器

旋转蒸发器、渗漏提取装置、显微熔点仪、高效液相色谱仪等。

2．试剂

甘草、去离子水、氢氧化钾、硫酸、乙醇等。

四、实验操作与过程

（1）市售甘草干燥，用粉碎机将其粉碎成粉末，过100目筛。

（2）用电子天平称取甘草粉末100 g，加蒸馏水500 m L，冷浸24 h，取上清液，加500 m L蒸馏水，再取上清液，加500 m L蒸馏水，经过滤，得到冷浸上清液，加浓硫酸调p H值到2左右，冷藏沉淀，过滤干燥得甘草酸粗品。

（3）甘草中甘草酸的测定。提取液摇匀，准确移取一定量的提取液转移到25 m L容量瓶中，用70%乙醇定容，静置20 min后，于254 nm处测定吸光度。据标准曲线计算提取液中甘草酸的浓度，再计算甘草酸提取率。公式如下：

Y=13.17X-0.017

式中 Y——吸光度；

X——浓度（mg/m L）。

甘草酸提取率= %100

其中 n——提取液稀释倍数；

C——提取液中甘草酸的浓度（mg/m L）；

V——提取液体积（m L）；

m——甘草的质量（mg）。

（4）甘草酸三钾盐的制备。称取3 g甘草酸粗品，加80 m L丙酮进行热回流，热回流2 h，倒出液体，加80 m L丙酮，2 h后第二次倒出液体，再加80 m L丙酮，2 h后第3次倒出液体，一共热回流3次，得到的丙酮酸液先进行过滤，然后进行蒸馏浓缩，浓缩到10 m L，加入70%的氢氧化钾乙醇溶液，调p H值到8～8.5，低温冷藏，静置得沉淀，该沉淀是甘草酸三钾盐。

（5）甘草酸单钾盐的制备。称取三钾盐0.7092 g，加入4.5 m L乙酸，在60℃下溶解，溶液冷却静置，再过滤得沉淀物，干燥得甘草酸单钾盐（粗品）0.3375 g，最后加入75%乙醇50 m L溶解，3 g粉末活性炭进行脱色3 h，过滤，浓缩放置，得甘草酸单钾盐。

（6）甘草酸单钾盐重结晶。使用75%乙醇20 m L溶解，离心去除不溶物，放置0℃～4℃冰箱重结晶，重复1次，得甘草酸单钾盐精品。

（7）甘草酸单钾盐的纯度鉴定。

① UV2550紫外—可见光谱的全波段扫描。配制0.01 mg/m L的甘草酸单钾盐水溶液，以水为参比溶液，进行200～400 nm的光谱扫描，确定其最大和最小吸收波长。

② 熔点的测定。按照显微熔点仪的使用说明进行甘草酸单钾盐精品的熔点测定，确定其熔程。

③ 选择HPLC面积归一法进行纯度的初步鉴定，色谱条件：C18色谱柱（250 mm×46 mm 0.5 μm），检测波长为258 nm，流动相为甲醇∶水∶冰乙酸∶乙腈（45∶36∶1∶20），流速为1.0 m L/min。

五、实验说明

（1）甘草原料中甘草酸的含量直接影响产品的质量，要求使用新疆产甘草或甘肃产甘草。

（2）三钾盐的制备所需 p H 值要严格控制，太高会导致甘草酸水解，太低会放慢反应速度。

（3）单钾盐使用乙酸来进行制备时，温度和时间要把握好。

六、思考题

1．为什么使用氢氧化钾和乙酸来进行甘草酸单钾盐的制备？

2．在制备过程中，哪些是关键控制点？简要说明理由。