激动剂及抑制剂

【实验目的】

加深理解酶的特异性、激动剂和抑制剂的概念与作用特点。

【实验原理】

酶对其作用物质（基质或底物）有严格的选择性，即酶的特异性。影响酶作用的因素很多，其中凡能降低酶活性的物质称为酶的抑制剂，凡能增强酶活性的物质称为酶的激动剂。本实验以唾液淀粉酶为例，于淀粉液和蔗糖液中，各加唾液并保温，检查它们是否被水解，以证明该酶的特异性。另外使各管淀粉和唾液浓度以及温度、作用时间等条件皆相同，只是分别加有氯化钠或铜盐的管和未加者对比观察结果，判定它们对酶活性有何影响。检查淀粉被水解情况，可利用碘反应。对碘反应，淀粉呈蓝色，而其水解产物大分子糊精呈紫色（紫色糊精）；其次的糊精呈红色（红色糊精）；至于小分子糊精（无色湖精）及麦芽精则为无色。所以，碘反应的色调可反映出淀粉被水解的程度，也表明酶活性的大小。也可用还原反应，因淀粉和蔗糖皆无还原性，而水解产物葡萄糖有还原性。

【实验器材】

白瓷板；试管；脱脂棉；乳头吸管；恒温水浴锅等。

【实验试剂】

1．1%淀粉液　可溶性淀粉1g加水约60ml摇匀，徐徐加热煮沸，使完全溶解，溶液变成透明后，加水到100ml，混匀。保存冷处，数日内不出现浑浊者可用；

2．1%NaCl　称取无水NaCl　1g，加水溶解成100ml。

3．0．2%CuSO4　称取CuSO4·5H2O　0．31g，加水溶解成100ml。

4．1%蔗糖　需要纯无还原者。称取蔗糖1g，加水溶解成100ml。

5．稀碘液　KI　0．4g加H2O数毫升，振动使溶解后，再加I20．2g，摇动使之溶解，加水成100ml混匀。

6．班氏试剂　柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，加水约700ml，加热溶解。另把硫酸铜结晶（CuSO4·5H2O）17．3g加水约100ml，加热溶解。冷后把硫酸铜液徐徐加入前液中，边加边摇匀，加水到1　000ml混匀。必要时过滤。

【实验方法】

1．采唾液：漱口后，用干净容器采取自然分泌的唾液0．5～lml加H2O稀释10倍，混匀。必要时用脱脂棉过滤。

2．取中试管5支，标记管号，分别按附表5加液：

附表5　唾液淀粉酶催化的反应体系

3．1～5管各加稀释的唾液0．5ml，充分混匀。

4．立即用乳头吸管由第1管取出1滴放在点滴盘凹内（或白瓷板上），加稀碘液1滴，混匀观察其所呈色调。以后每隔一定时间（隔2min或数分钟）再重新取出1滴做碘反应。连续观察了解管内淀粉水解情况，到已成红色时，向2～5管各加稀碘液l～2滴，混匀，记录各管色调。

5．向2～5管各加班氏试剂2ml混匀，放沸水浴中煮约5min，取出观察结果。

6．以3～5管分别与2管结果进行对比分析，作出总结。

【注意事项】

1．唾液淀粉酶属于α型淀粉酶，最适pH6．9，氯离子有激活作用。

2．本实验中设置了相同的1、2两管作为对照管。第1管为了用于随时取出做碘反应，以了解淀粉水解进行情况。掌握此管水解达到尚有红色糊精存在的程度，同时向2～5管加碘液，便于判定结果。

3．唾液含淀粉酶的浓度生理变动较大，实验中水解作用的时间间隔要根据具体情况灵活掌握。如反应速度较快，要抓紧时机，间隔要小。如果反映缓慢，则需要时间稍长些，或者同时把各管放在37～40℃水浴中，以加快反应过程。

4．凡关于酶类试验，要特别注意器材干净，试剂宜较纯，避免有抑制因素、杂质干扰而影响结果。

（肖建英）