如何进行接菌

24.如何进行接菌？

（1）培养室就地接菌法：即“一锅一室”接菌法，采用此接种法，培养室的养菌量必须同灭菌锅当日的灭菌量相同，料袋灭菌后一次性搬入培养室，进行空间消毒灭菌。灭菌后工作人员一次性接菌结束，不再搬动，就地养菌。

接菌按严格无菌操作的规程进行。接种者穿白色清洁的工作服，戴上医用手套，用70%～75%的酒精消毒双手。当料袋温度下降到30℃，便可以进行接种。培养室就地接菌可以边打穴边接种，不贴胶布。打穴工具用直径1.5厘米的铁制或木制棒钻孔打穴，每袋正面打四穴（或正面打三穴，背面打三穴）。打穴前，所有的接菌工具都要严格消毒灭菌，再用75%的酒精涂擦菌袋接种面，边打边迅速将菌接种入穴内，打穴深度2～2.5厘米。菌种要与培养料结合紧密，不留空隙，菌种于穴口微凸起1～2毫米，形成“钉帽状”，并要稍压紧。

接种配备3人一组，分别为传袋、打穴、接种流水作业，一般每次接种1　500袋需要安排两组，一次性完成。接种时，人员不要走动和谈话，以免妨碍接种效果。如果气温高，接种要在深夜或凌晨气温低时进行。

培养室就地接菌虽然可以节约胶布，接种方便，速度快，但一定要严格按接菌要求进行，接完后不要搬动。无胶布封口基内水分易蒸发，培养室的空气相对湿度要保持在65%～70%，否则，菌种易干缩，影响成活率，容易感染杂菌。

（2）无菌室接菌：培养室大，灭菌量小，可采用无菌室接种。没有专用的无菌室，可以在房间的一角用宽幅簿膜制成小房间代替，要求设有缓冲间，封闭后不能与外界空气流通交换。

无菌室和缓冲间要安装30瓦紫外线灯一支，接菌前采用药剂灭菌。再用紫外线灯灭菌30分钟，要采取边打穴、边接种、边封口。接种时，菌种瓶口要始终用酒精灯焰封住，用接种器在菌瓶内提出菌种，迅速地通过酒精灯焰区，把菌种接入穴内。然后用剪好的3.25厘米×3.25厘米胶布贴封穴口。菌种要接足量并要微凸。胶布要贴在穴中心，四边等宽、粘牢。一般每瓶菌（500克菌瓶）可接20袋左右。一批接完后，要开门窗换气30～40分钟，再接第二批重新灭菌。有条件的单位可以采用新的灭菌接种技术：室内悬挂一台消毒器，打开定时开关，根据接菌室的大小灭菌30～60分钟，即可接菌。此法省工省时，无异味无刺激，可采用先打穴套袋法，不贴胶布，效果很好。

（3）摆袋养菌：

①平地堆叠法：按“井”字形横直交叉，前期每行排4袋，依次重叠10层，计40袋为一堆，一般15米2可堆摆1200袋左右。摆袋时，菌袋的接种穴应朝向侧面，防止上下袋压住菌穴影响透气，造成闷种。

②起架摆放养菌法：可根据架层间距离的大小，每层摆三四层袋，起架摆袋。由于室内菌袋密度大，一开始摆袋就要3袋横直交叉，以利于通气和防止堆温超标。