【原理】 用嗜酸性粒细胞稀释液将血液稀释一定倍数,同时破坏红细胞,并将嗜酸性粒细胞着色,然后滴入计数盘中,计数嗜酸性粒细胞数,即可求得每升血液中嗜酸性粒细胞数。
【试剂和器材】
1.溴甲酚紫稀释液 蒸馏水50ml加溴甲酚紫25mg,又称嗜酸性粒细胞稀释液,嗜酸性粒细胞稀释液为低渗溶液,可使红细胞和其他白细胞溶解,而嗜酸性颗粒为非水溶性颗粒,因此不被溶解。溴甲酚紫为指示剂,在本稀释液中,可使嗜酸性颗粒呈紫蓝色,以便识别和计数。
2.丙酮-伊红稀释液 丙酮5ml,20g/L伊红水溶液5ml,蒸馏水90ml,混匀。
本稀释液中丙酮可阻止嗜酸性颗粒溶解,为嗜酸粒细胞保护剂,伊红为染料。丙酮容易挥发,应新鲜配制。在4℃冰箱内只能保存1周。
4.血细胞计数盘(改良Neubauer式)
【操作方法】
1.用微量采血管取末梢血20μl,擦去管外余血。
2.加入盛有0.38ml嗜酸粒细胞稀释液的小试管中,用稀释液将管壁黏附血液全部洗下,混匀,使血液稀释20倍。
3.将稀释血细胞滴入计数盘两侧计数室。
4.于平皿湿室内静置5min后,在高倍镜下计数两侧计数室(四角和中央共10个大方格)嗜酸粒细胞数。
计算:
嗜酸性粒细胞数/L=计数细胞数×106×20
【正常参考值】 (0.05~0.30)×109/L。
【临床意义】
1.生理变化 在劳动、寒冷、饥饿、精神刺激等情况下,交感神经兴奋,下丘脑分泌ACTH释放激素,促使腺垂体分泌ACTH,使肾上腺皮质分泌糖皮质激素。糖皮质激素能阻止骨髓释放嗜酸性粒细胞,并促使外周血中嗜酸性粒细胞进入组织,从而导致外周血中嗜酸性粒细胞减少,所以正常人嗜酸性粒细胞白天较低,夜间较高,上午波动较大,下午较恒定。
2.病理变化
(1)增多:①变态反应性疾病,如支气管哮喘、荨麻疹、食物过敏等;②寄生虫病,如肺吸虫病、包囊虫病、血吸虫病、绦虫病等;③皮肤病,如牛皮癣、湿疹等;④血液病,如慢性粒细胞性白血病、霍奇金病等。
(2)减少:见于伤寒、皮质醇增多症、手术以及应用肾上腺皮质激素后。
【注意事项】
1.为防止嗜酸性粒细胞逐渐破碎而致结果偏低,应在0.5h内计数完毕。
2.在血液稀释混匀中,不宜用力振荡,以免嗜酸性粒细胞破碎。
3.住院病人嗜酸性粒细胞计数,应固定时间进行,以免日间受生理变化的影响。
4.各种用具要清洁,否则影响嗜酸性粒细胞着色和计数。
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