发芽培养基与生根培养基蔗糖浓度

1.材料和培养

材料来源同第二章第二节材料与方法。采用BG11液体培养基培养，于60μE/m2·s、28±2℃下通气培养。

2.开放式半连续培养系统与培养条件

野外试验站开放式跑道循环培养池由一个长34m、宽6m的矩形池和两端分别加一个半径为3m的半圆池组成，培养池深45cm，接入藻种后培养基实际深度20cm。

取处于对数生长期的藻种，用玻璃匀浆器轻轻地匀浆，然后接入光生物反应器中，从底部向培养液中通入无菌的湿风。置于温室中，自然光照射，采用遮阴网控制光强，没有特别需要时，温室温度控制在30℃以下。

按相同方式将光生物反应器中处于对数生长期的藻种接入温室内的小循环培养池，然后收集小循环培养池中处于对数生长期的藻种，按相同方式转接到大的开放式跑道循环培养池。光和温度与光生物反应器中培养条件相同，用叶轮驱动在跑道池中循环流动培养，如图版Ⅲ所示。

3.生物量的测定

每天定时用真空泵抽出藻液，然后加入相同体积的新鲜培养基。在更换培养基前后分别取200mL培养液，Whatman GF/C滤纸过滤，用蒸馏水冲洗3次，在80℃下干燥24h，称重。

4.生长测定

培养物的生长用叶绿素含量变化表示。在每个周期培养中，留下一个小循环培养池连续培养，小培养池同大培养池具有相同的比表面积(表面积与体积的比值)和流速。定时取一定体积的培养物(4个重复)，5000r/min离心10min，去除上清液，加入95%的乙醇提取叶绿素，4℃冰箱中过夜，中间摇匀2～3次以便充分提取。用分光光度计分别在665nm和649nm波长下测定光吸收值OD665和OD649，用公式C=13.7×OD665-5.76×OD649计算叶绿素浓度(μg/mL)(Wintermans＆de Mots，1965)。生长速度用公式:K10=log(C1/C0)/(t1-t0)，K(div./day)=3.322K10计算，则增代时间为:d=1/K，式中C0、C1分别代表培养物在时间t0、t1时的叶绿素浓度。

5.多糖的提取与测定

多糖的提取按Jarman et al.(1978)和Huang et al.(1998)的方法进行。多糖的测定与第二章第一节材料与方法相同。