免疫化学法

不少药物都是半抗原或抗原,均可引起变态反应。若能制备这些药物相应的特异性抗体,可根据抗原-抗体反应的特异性,应用免疫化学法检测这些药物浓度。TDM应用免疫化学法多采用竞争性免疫分析,即通过定量加入少量的特异性抗体,与标本中相应的抗原或半抗原性药物及定量加入的标记药物,产生竞争性结合,检测标记药物与抗体结合的抑制程度,与同样处理的标准管比较,对样本中的药物进行定量。免疫化学法灵敏度极高,可达ng甚至pg检测水平,满足所有药物TDM的要求。该法所需标本量少,一般均不需预处理,操作简便,并可制成商品化试剂盒。还可利用一般生化、荧光自动分析仪进行自动化操作。

但TDM中免疫法存在的主要问题是,特异性易受干扰。干扰因素除来自内源性物质外,特殊的是抗原性决定基团未发生变化的待测药物的代谢,或具相同相似抗原性的其他药物及代谢物。如强心药地高辛、洋地黄毒苷、地高辛代谢物二氢地高辛,均可与地高辛抗体结合。在体内几乎不发生代谢转化以原型排泄的药物,较少代谢物干扰,尤其适用于免疫法检测,如庆大霉素等氨基苷类抗生素。只有具备完全或半抗原性的药物,并能制备特异性抗体,才能用免疫化学法进行TDM。

免疫化学法根据标记物性质不同,可分为放射免疫法、荧光免疫法和酶免疫法三类。根据测定中是否要分离与抗体结合和未结合的标记物,又可分为多相和均相免疫分析法两种。

1.放射免疫法(RIA) RIA存在放射性污染,又是多相体系,分离结合与未结合标记物操作繁杂,影响因素多,分离效果直接影响测定结果,但灵敏度高,标记技术相对成熟,国内生产的TDM试剂盒多为此类。

2.荧光免疫法(FIA) FIA按反应体系及定量方法不同,又可分若干种。与放射免疫法相比,荧光免疫法无放射性污染,并且大多操作简便,便于推广。国外生产的TDM试剂盒,有相当一部分即属于此类,并且还有专供TDM荧光偏振免疫自动分析仪。FIA比较敏感,抗生素、抗癌药物、抗哮喘药等均可用FIA测定。

3.酶免疫分析法(EIA) EIA是目前国外TDM免疫分析中最常用的方法,特别是均相酶免疫分析法。本法除具有荧光免疫法的优点外,通过选用合适的标记酶,在目前已较广泛普及的多种自动化分析仪可实现自动化操作,更利于推广。特别是近年来,在TDM的酶免疫分析中,应用酶偶联反应原理,以辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)标记药物,将葡萄糖氧化酶蛋白、偶联辅助酶——过氧化物酶及底物和显色剂4-氯-1-萘酚固化在薄膜上,制成类似p H试纸样的试条。测定时,只要滴上微量标本,根据呈色深浅,即可作出药物浓度的粗略判断。使临床医师病床旁方便快速进行TDM成为可能。目前国外已有供茶碱和苯妥英钠测定的试条上市。这一方法的推广,将有助于促进TDM的普及,具有良好的发展前景。

必须指出,多数需进行TDM的药物,都有多种方法可供选用,应根据待测药物的有效血药浓度水平所决定的灵敏度要求,是否需同时检测多种药物或活性代谢物,可供选用的仪器设备及检测经济成本等,综合考虑,确定能满足临床要求的可行方法。

(张静文 田 华)

思考题

1.影响血药浓度的因素有哪些?

2.治疗药物监测常用标本及处理要求有哪些?

3.治疗药物监测的方法及特点有哪些?