产蛋白酶海洋微生物

1.产蛋白酶微生物的种类

产蛋白酶微生物包括细菌、古菌、放线菌、霉菌和酵母菌。细菌有黄杆菌属（Flavobacterium）、芽孢杆菌属（Bacillus）、假交替单胞菌属（Pseudoalteromonas）、弧菌属（Vibrio）、别单胞菌属（Alteromonas）、科尔韦尔氏菌属（Colwellia）、海洋芽孢杆菌属（Oceanobacillus）、假单胞菌属（Pseudomonas）、玫瑰杆菌属（Roseobacter）、芽孢八迭球菌属（Sporosarcina）和蛀船蛤杆菌（Teredinobacter）；古菌为甲烷球菌属（Methanococcus）；放线菌有链霉菌属（Streptomyces）和糖多孢菌属（Saccharopolyspora）等；霉菌有曲霉属（Aspergillus）、青霉属（Penicillium）和侧齿霉属（Engyodontium）等；酵母菌有短梗霉属（Aureobasidium）和梅奇酵母属（Metschnikowia）等。

2.菌种的选育

根据海洋微生物的生态特征，采集浅海、深海或红树林的海水、沉积物或海洋生物如海鱼、船蛆、贝类、海胆、海蟹和海藻等样品，根据欲分离的对象，使用稀释涂布分离法或平板划线分离法在不同的培养基（通常用陈海水或人工海水配制）平板上分离纯化微生物，获得纯种。细菌分离用2216E培养基；霉菌分离用麦芽汁琼脂（MEA）、玉米粉琼脂（CMA）和察氏培养基（CDA）（对于深海样品，使用1/5浓度的培养基以模拟其低营养条件），其中添加0.1%链霉素（100mL培养基加0.1g）和青霉素（100mL培养基加40000U）抑制细菌生长；酵母分离用补充0.05%氯霉素的酵母膏蛋白胨葡萄糖（YPD）琼脂。细菌用含脱脂牛奶的胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）；放线菌用淀粉酪蛋白琼脂（SCA），其中加放线菌酮50μg/mL使真菌减至最低数量；霉菌用补充1%的脱脂奶粉的CDA；酵母用含2.0%酪蛋白的YPD琼脂定性测试微生物蛋白酶的能力。通过筛选获得若干产酶性能较好的菌株，按照生产菌种性能要求分别测定它们的发酵产酶能力，最后确定1～3株产酶能力高的菌株。直接从自然界分离到的菌种一般不能直接用于生产，需要经过一系列漫长的选育过程才能满足生产的要求。诱变育种是常用的菌种选育方法，即利用物理或化学诱变剂处理待选菌株，促使其提高突变率，从中选出性能优良的突变菌株。中国水产科学研究院黄海水产研究所以黄海黄杆菌YS-9412-130菌株为出发株，经亚硝基胍、硫酸二乙酯、紫外线（UV）与微波（MI）复合诱变和自然选育，获得一株产低温碱性蛋白酶高产稳定的突变株YS-9412-130-SW1-104，其低温碱性蛋白酶产量为出发株的16倍。