葡萄种质资源遗传多样性

葡萄（vitis L.）种质资源ISSR分析

ISSR ANALYSIS OF VITIS L. GERMPLASM RESOURCES

作者：蒲小龙　　导师：潘东明

福建农林大学　　园艺学2011届硕士

摘　要

葡萄，是葡萄科(Vitaceae Lindl．)葡萄属(Vitis L．)植物，具有悠久的栽培历史。本文以9l份葡萄样品为材料，采用ISSR标记技术对其遗传多样性进行分析。旨在利用一种高效的分子标记技术，对生产中常见的葡萄种质资源进行分类鉴定，以及对生产中产生的同名异物或同物异名品种进行鉴别，为葡萄杂交育种和产业健康、持续地发展提供理论指导。主要研究结果如下：

1．　改进了葡萄总DNA的提取方法。本文以葡萄叶片为材料，采用改良CTAB法提取葡萄总DNA。结果表明，改良的CTAB法所提取的DNA质量和纯度较高，满足葡萄ISSR分析要求。与传统的提取方法相比，具有耗时少、操作简单，并能有效地降低葡萄DNA提取过程中酚类化合物、多糖等物质对DNA的污染。

2．　优化了葡萄ISSR-PCR反应体系。以巨峰和刺葡萄DNA为模板，优化了葡萄ISSR-PCR反应体系。最佳反应体系：在20 μL反应体系中，10×Buffer 2μL，基因组DNA为20 ng，dNTP为0.20 mmol/L，引物为0.35 μmol/L，TaqDNA聚合酶为2.0U，ddH₂O为15.5μL。最佳反应程序：94℃预变性1.5 min 94℃变性40 s；退火1 min 72℃延伸1.5 min(40个循环)；最后72℃延伸5 min后于4℃保存。

3．　进行了葡萄ISSR-PCR扩增反应。从100条ISSR随机引物中筛选出15条，对91个葡萄资源进行ISSR-PCR扩增，并对扩增产物进行分析。结果表明：91个葡萄品种进行ISSR-PCR扩增后共获得237个扩增位点，其中多态性位点有214个，多态性比率达到90.2%。

4．　分析了葡萄种质资源的多样性。利用SPSSl3.0软件对ISSR-PCR扩增位点的数据矩阵进行统计分析。结果表明：91个葡萄品种的相似系数在0.546～0.853之间，可以划分为欧亚种葡萄、欧美杂交种葡萄和野生资源3个大类。推测出“闽北绿葡萄”属于欧亚种葡萄；“台湾巨峰”与“天奇缘”品种的相似度极高；“日本巨峰”很可能是巨峰葡萄的优良实生后代。

5．　比较了样品的植物学特征及聚类结果。对91份葡萄样品的植物学特征及聚类结果进行了综合比较与分析。结果表明：葡萄果皮颜色很可能与其栽培驯化程度有连锁关系，且随着栽培驯化程度越高，其果皮颜色越淡；抗病性和抗逆性也有可能与其栽培驯化程度有连锁关系，并随着栽培驯化程度越高，抗性逐渐减弱。