尿常规检测

尿常规检测_生物化学实验技术

实验项目十一　尿常规检测

学习目标

【知识目标】

（1）能用自己的语言描述尿常规检测的原理。

（2）能够迅速而准确地陈述尿常规实验的操作要点。

（3）能够准确鉴别尿常规检测结果，并能说明其临床意义。

【能力目标】

（1）能够正确完成尿常规检测的各项操作内容，做到步骤正确、动作连贯协调、内容全面无遗漏。

（2）能够正确指导受试者采集尿液，以及有哪些注意事项。

（3）能够正确分析尿常规检测结果。

案例引导

患者，男，35岁。近日开始忽然觉得腰疼，并伴有尿频、尿急、尿痛，肾区叩击痛，膀胱区压痛，发热。尿常规检测结果显示：白细胞（＋＋），尿蛋白（＋）。请结合患者症状及尿常规检测结果作出初步诊断。

（提示：急性肾炎）

操作流程

一、尿蛋白定性实验

（一）加热乙酸法

【实验原理】

加热可使蛋白质变性凝固，加酸可使蛋白质接近等电点，促使蛋白质沉淀。此外，加酸还可溶解碱性盐类沉淀物。

【药品及试剂】

乙酸，氯化钠。

【试剂配制】

（1）5%乙酸溶液。

（2）饱和氯化钠溶液。

【操作步骤】

（1）将约10mL新鲜尿液移入一支耐热的12mm×100mm试管内。

（2）将试管斜置于火焰上，煮沸上部尿液。

（3）滴加5%乙酸3～4滴，煮沸后，立即观察结果。如果有混浊或沉淀，提示尿内含有蛋白质。

【实验数据处理及结果分析】

（1）阴性（－）：不显混浊。

（2）可疑（±）：在黑色背景下呈轻微混浊。

（3）阳性（＋）：呈明显白雾状，蛋白质含量为0.1～0.5g/L。

（＋＋）：呈混浊，有明显颗粒，蛋白质含量为0.5～2.0g/L。

（＋＋＋）：大量絮片状沉淀，浑浊，蛋白质含量为2.0～5.0g/L。

（＋＋＋＋）：出现凝块并有大量絮片状沉淀，蛋白质含量为大于5.0g/L。

【注意事项】

（1）加5mL尿液、50%乙酸溶液1mL及饱和氯化钠溶液3mL并混匀，如有黏蛋白存在，可防止其沉淀。

（2）本法干扰因素少，敏感度为0.15g/L。

（3）加酸过多会导致远离蛋白质等电点，使得蛋白质微粒获得电荷增加，可呈假阴性。

（4）无盐或低盐饮食的患者因尿内电解质含量少，可致假阴性。实验时可先加1～2滴饱和氯化钠溶液于尿液中，再进行操作。

（二）试带法

【实验原理】

采用pH值指示剂的蛋白质误差原理。在缓冲液中pH值恒定（pH＝3），当有蛋白质存在时，指示剂释放H＋，产生颜色变化。这种色泽变化与蛋白质含量呈正比。

【实验器材】

尿液分析仪。

【药品及试剂】

尿试带。

【操作步骤】

若选用优质尿试带，使用方法详见商品说明书；若使用尿液分析仪，最好使用配套试带，按照仪器说明书进行操作。

【实验数据处理及结果分析】

正常为阴性。

【注意事项】

（1）试带法对尿中清蛋白敏感，对其他蛋白，如球蛋白、肌红蛋白、血红蛋白、本－周氏蛋白和黏蛋白不敏感，通常检测结果为阴性。

（2）若尿中含有本－周氏蛋白时，使用此方法检测结果常呈阴性，应再用加热乙酸法或磺基水杨酸法复查，以免阳性结果漏诊。

（3）强碱性尿液可致假阳性结果。

（4）试带法仅适用于正常人及肾病筛查，不适用于对肾病患者的疗效观察、预后判断及病情轻重的估计。

【实验意义】

分为功能性、体位性、偶然性、病理性蛋白尿，后者常见于肾炎、肾病综合征等。

二、尿血红蛋白定性实验（试带法）

【实验原理】

血红蛋白具有过氧化物酶样作用，以催化H₂O₂作为电子受体使色原氧化呈色，其颜色的深浅与血红蛋白含量呈正比，又称为尿隐血实验。

【实验器材】

尿液分析仪。

【药品及试剂】

尿试带，邻联甲苯胺，过氧化氢，硫酸铵。

【试剂配制】

（1）10g/L邻联甲苯胺溶液：取邻联甲苯胺1g，溶解于冰乙酸和无水乙醇各50 mL的混合液中，置于棕色瓶中后放入冰箱内保存。若溶液变为深褐色，则应重新配制。

（2）过氧化氢溶液：冰乙酸1份，加3%过氧化氢溶液2份。

【操作步骤】

使用尿液分析仪，按照仪器说明书进行操作。

【实验数据处理及结果分析】

完整红细胞在试带上溶解，释放血红蛋白，呈绿色斑状，血红蛋白或肌红蛋白尿呈均匀绿色。

【注意事项】

（1）当尿液中含有强氧化剂或某些过氧化物酶菌时，可导致试带法结果呈假阳性。为防止此类假阳性，可将尿液煮沸2min，再用试带进行检测。

（2）大剂量维生素C可致假阳性结果。部分品牌试带因使用含碘酯盐清洁剂的试剂垫，而排除了维生素C的干扰。

【实验意义】

尿液中含有游离血红蛋白时称为血红蛋白尿，血红蛋白尿为透明的鲜红色（含氧血红蛋白）或暗红色（含高铁血红蛋白），严重者呈浓茶色或酱油色，离心后颜色会发生改变。沉渣中无红细胞，尿隐血实验呈阳性。

正常人尿液中无游离血红蛋白。当体内大量溶血，尤其是血管内溶血时，血液中的游离血红蛋白可大量增加。当超过1.00～1.35g/L时，即出现血红蛋白尿。此种情况常见于血型不合输血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、寒冷性血红蛋白尿症、急性溶血性疾病等。还可见于各种病毒感染、链球菌败血症、疟疾、大面积烧伤、体外循环、肾透析、手术后所致的红细胞大量破坏等。

三、尿葡萄糖定性实验（试带法）

【实验原理】

尿液中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下，生成葡萄糖酸内酯和过氧化氢。在有过氧化物酶的情况下，以过氧化氢为电子受体使色素原（如邻联甲苯胺、碘化钾等）氧化而呈色。

【实验器材】

尿液分析仪。

【药品及试剂】

尿试带。

【操作步骤】

将试带浸入尿液中，5s后取出。1min后在自然光线或日光灯下与标准板比较。试带法比班氏法敏感。使用尿液分析仪时，按照仪器说明书进行操作。

【实验数据处理及结果分析】

正常尿液尿糖应该为阴性。

【注意事项】

（1）尿标本要新鲜。

（2）服用大量维生素C或汞利尿剂后检测结果可呈假阳性。

（3）本法为酶促反应，灵敏度约为5.5mmol/L。操作时必须按规定时间准时与标准板比较，否则色深影响结果。

（4）试带易失效，不可暴露于空气中及阳光下。

（5）尿比密和温度会影响试带的灵敏度，比密增高或温度降低时，试带法葡萄糖检测灵敏度下降。

（6）受到强氧化剂或过氧化物污染可致假阳性结果。

（7）当尿中含高浓度酮体时，可降低试带法的灵敏度。

【实验意义】

尿糖阳性常见于糖尿病、肾性糖尿病、甲状旁腺功能亢进等。内服或注射大量葡萄糖及精神激动等因素也可导致阳性反应。

四、尿酮体检测（试带法）

【实验原理】

在含酮体的尿液中加入亚硝基铁氰化钠后，与氨液接触时出现紫色环。在实验中加入少量冰乙酸可防止过量肌酐所引起的假阳性。

【实验器材】

尿液分析仪。

【药品及试剂】

尿试带。

【操作步骤】

使用尿液分析仪，最好使用配套试带，按照仪器说明书进行操作。部分品牌试带含甘氨酸组分，能同时检测丙酮和乙酰乙酸。

【实验数据处理及结果分析】

正常时为阴性。

【注意事项】

（1）试带法检测乙酰乙酸的灵敏度为50～100mg/L，丙酮的灵敏度为500～700 mg/L，不能检出β－羟丁酸。

（2）含游离巯基基团的物质均可致假阳性结果。

（3）尿液必须新鲜。

【实验意义】

酮尿是代谢性酸中毒的表现，常见于糖尿病酸中毒，某些发热性疾患，如伤寒、猩红热、麻疹、败血症、急性粟粒性结核病，中毒，如磷、氯仿、乙醚等，以及手术麻醉后。

五、尿胆红素定性实验（试带法）

【实验原理】

在强酸性介质中，胆红素与试带上的二氯苯胺重氮盐起偶联作用，生成红色偶氮化合物。

【实验器材】

尿液分析仪。

【药品及试剂】

尿试带。

【操作步骤】

将试带浸入被检尿内1min（或按产品说明书要求的时间），取出后与标准色板比色。或使用尿液分析仪，按照仪器说明书进行操作。

【实验数据处理及结果分析】

正常时为阴性。

【注意事项】

（1）试带应避光，保存于室温干燥处。注意失效期。

（2）尿液中含有高浓度的维生素C（浓度高于0.5g/L）和亚硝酸盐时，会抑制偶氮反应，可出现假阴性结果；当患者接受大剂量氯丙嗪治疗以及尿中含有盐酸苯偶氮吡啶（泌尿道止痛药）的代谢产物时，可出现假阳性结果。

（3）试带在使用和保存过程中，不能接触酸碱物质和气体，也不能用手触摸试带上的模块。

（4）尿标本应新鲜。

（5）试带法灵敏度较低（7～14μmol/L或0.4～0.8mg/dL胆红素）。

【实验意义】

在肝实质性及阻塞性黄疸时，尿中均可出现胆红素。在溶血性黄疸患者的尿中，一般不见胆红素。

六、尿胆原定性实验

【实验原理】

该实验有采用基于Ehrlich法原理的试带，也有采用基于偶氮反应原理的试带，后者是在酸性条件下，尿胆原与重氮盐反应，形成重氮色素。

【实验器材】

尿液分析仪。

【药品及试剂】

尿试带。

【操作步骤】

使用尿液分析仪，最好使用配套试带，按照仪器说明书进行操作。

【实验数据处理及结果分析】

尿胆原定性检查正常值为阳性或弱阳性。定量检测根据实验室及方法略有差异。

【注意事项】

（1）试带法检测尿胆原的灵敏度为1～4mg/L。

（2）尿中存在磺胺类药物、氯丙嗪类药物可使Ehrlich法试带出现假阳性结果。

（3）采用偶氮反应试带对尿胆原特异，不受能与Ehrlich反应的物质（如尿紫胆原）的影响。

【实验意义】

（1）正常人为阳性（＋）反应，尿液稀释20倍后多为阴性反应。

（2）尿胆原阴性常见于完全阻塞性黄疸。

（3）尿胆原增加常见于溶血性疾患及肝实质性病变，如肝炎。

七、尿亚硝酸盐定性实验（试带法）

【实验原理】

亚硝酸盐与芳香胺发生重氮反应形成重氮盐，随后发生偶联反应，形成重氮色素。

【实验器材】

尿液分析仪。

【药品及试剂】

尿试带。

【操作步骤】

使用尿液分析仪，按照仪器说明书进行操作。

【实验数据处理及结果分析】

正常时为阴性。

【注意事项】

（1）尿液必须新鲜。

（2）亚硝酸盐结果阳性与致病菌数量没有直接关系。试带法灵敏度约为0.5 mg/L，相当于微生物含量大于1×10⁵个/mL。

（3）高浓度维生素C可致假阴性结果。因为维生素C直接和重氮盐反应形成无色产物，阻止了偶联反应，试带就不发生颜色变化。

【实验意义】

（1）正常人为阴性。

（2）尿路细菌感染，如大肠埃希菌属、克雷伯杆菌属、变性杆菌属和假单胞菌属感染者可呈阳性。

八、尿白细胞检测（试带法）

【实验原理】

粒细胞的酯酶能水解吲哚酚酯，生成吲哚酚和有机酸，吲哚酚可进一步氧化形成靛蓝；或吲哚酚和重氮盐反应生成重氮色素。

【实验器材】

尿液分析仪。

【药品及试剂】

尿试带。

【操作步骤】

使用尿液分析仪，最好使用配套试带，按照仪器说明书进行操作。

【实验数据处理及结果分析】

正常时为阴性。

【注意事项】

（1）细胞质含嗜苯胺蓝颗粒的细胞，如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞均有白细胞酯酶，试带法呈阳性结果，而淋巴细胞呈阴性结果。

（2）试带法白细胞酯酶检测的灵敏度为10～25个/μL。

（3）阴道分泌物污染可致假阳性结果。

（4）尿蛋白质浓度（大于5g/L）增高、葡萄糖浓度（大于30g/L）增高或比密降低可致假阴性结果。

【实验意义】

（1）正常人为阴性。

（2）阳性提示尿路炎症，如肾脏或下尿道炎症，包括肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎和前列腺炎，表明尿液中白细胞数量大于20个/μL。

能力检测

一、单项选择题

1.关于尿蛋白试带法检验的叙述，以下错误的是（　　）。

A.黄疸尿对结果有影响　　　B.尿液pH值对结果有影响

C.对清蛋白和球蛋白均敏感　D.混浊尿不影响比色

E.尿液标本应新鲜

2.不符合尿液分析仪正确叙述的是（　　）。

A.采用球面积分析仪接受双波长反射光

B.测定简单、快速、用尿量少

C.尿蛋白测定采用指示剂蛋白误差原理

D.不可完全替代显微镜检查

E.检查葡萄糖特异性不如班氏定性法

3.正常情况下，能被肾脏几乎重吸收的物质是（　　）。

A.尿素　　B.肌酐　　C.尿酸　　D.镁　　E.葡萄糖

4.正常人剧烈运动后，尿液中可出现（　　）。

A.红细胞管型　　B.白细胞管型

C.透胆管型　　　D.蜡样管型

E.颗粒管型

5.关于试带法检测亚硝酸盐的叙述，下列错误的是（　　）。

A.正常人尿液中有适量硝酸盐

B.结果阴性不能完全排除菌尿的可能

C.结果阳性不能完全肯定泌尿系统感染

D.标本放置过久可呈假阳性

E.阳性率与感染细菌含有硝酸盐氧化酶有关