真核生物的转化

真核生物的转化

在酵母菌、脉孢菌和植物细胞中转化的主要障碍是细胞壁。把细胞壁用酶消化后便能有效地转化。高等动物细胞的转化大多是在离体培养细胞中发现的，例如小鼠细胞、鸡胚细胞和人的海拉细胞等，这些细胞常以胞饮方式摄取物质。使供体DNA形成磷酸钙沉淀能显著地提高转化效率。由于高等动植物细胞的转化频率远远低于细菌，因此一个转化实验能否成功在很大程度上取决于选择性培养基和选择性标记的恰当使用。例如在一个哺乳动物细胞的转化系统中，用取自疱疹病毒（HSV）的胸腺嘧啶核苷激酶（TK）基因DNA去转化相应的缺陷型细胞TK－，并用HAT培养基来筛选有TK＋基因标记的转化细胞便能成功。在同一转化系统中，如果把大量没有选择性标记的DNA混合少量有TK基因选择标记的DNA去转化TK－细胞，这样得到的T－细胞中将有一小部分也为无选择性标记的DNA所转化，这种现象称为共转化。

在高等动物中虽然现在还不能进行活体的转化，但可以把转化细胞注射到活体中，使它们取代活体中未转化的细胞。例如可以用抗氨甲蝶呤的小鼠细胞株的DNA片段转化体外培养的小鼠骨髓细胞（这些细胞有特定的染色体标记，易于与受体小鼠的骨髓细胞相区别），然后把转化的骨髓细胞注入受体小鼠的骨髓。在一段时间后这些小鼠的骨髓中可以检出抗氨甲蝶呤的细胞。如果为接受注射的小鼠经常注射氨甲蝶呤，随着饲养时间的推移可以看到带有特定染色体标记的细胞的百分数逐渐增加，此种情况说明抗氨甲蝶呤的细胞经过细胞分裂增殖而部分地取代了未转化的细胞。这样的工作显然是向基因治疗这一目标跨出的第一步。在高等植物中某些体细胞能在一定的培养条件下生长成完整的植株，因此便有可能通过转化培养细胞培育成不同基因型的新种植株。

在真核生物的细胞生物学研究中，转化这一名词还有另一种意义，这就是由致癌的RNA或DNA病毒感染真核细胞引起的细胞癌变现象。进入细胞的病毒基因组DNA往往整合到被转化的细胞的染色体上。为了明确起见，这种转化有时又称为细胞转化。