影响发状念珠藻细胞固态培养的因素

6．8．5　影响发状念珠藻细胞固态培养的因素

6．8．5．1　沙粒直径大小

分别将发状念珠藻细胞培养在颗粒直径小于0．44mm、0．44～0．95mm和大于0．95mm的三种不同沙粒上，在相同的接种量及培养条件下，发状念珠藻细胞在各种不同大小的沙粒上均有生长，但生长状况差异显著。培养100天后，从藻落表面积、厚度及密度等方面观察，在颗粒直径小于0．44mm的沙粒上生长的发状念珠藻细胞明显优于在颗粒大于0．95mm的沙粒上生长的发状念珠藻细胞，藻落面积前者为后者的4．14倍。

颗粒较小的培养基质有利于发状念珠藻细胞的生长，可能是因为细胞在较大的颗粒上生长时，难以附着在沙粒表面，并且颗粒大的沙粒间孔隙较大，通气透水性强，蓄水和保肥能力差，发状念珠藻细胞吸收周围的营养物质较为困难，生长较为缓慢。而颗粒小的沙粒，其表面积大，沙粒间的间隙较小，易于发状念珠藻细胞吸收周围的营养物质。此外，沙粒间孔隙较大时，发状念珠藻细胞容易渗透至土层以下。在培养100天之后，培养皿的底部，沙层之下亦可观察到发状念珠藻细胞的生长。

6．8．5．2　氮源

在相同颗粒大小的沙粒上培养发状念珠藻细胞100天后，在添加了以硝酸钠为氮源的沙粒上，发状念珠藻细胞生长浓密，呈现出鲜绿色。而在没有添加氮源的沙粒上，发状念珠藻的密度明显较低，并呈现黄绿色，表明培养基中有一定浓度的氮源有利于发状念珠藻细胞的生长。尽管发状念珠藻是固氮蓝藻，但固氮是一个非常耗能的过程，如以一分子游离态的氮被固定为氨计算，就要消耗16分子的ATP。光合作用产生的能量被固氮作用所消耗，加之发状念珠藻细胞中只有异形胞可以固氮，进行无氮培养可能会造成生长过程中氮源不足，造成细胞生长缓慢。

6．8．5．3　光照强度

在发状念珠藻生长适宜的光照范围内，光照强度高有利于其生长。在较高光强下（20μmol· m^－2· s^－1～45μmol· m^－2· s^－1），发状念珠藻细胞团密集且明显向表面隆起，生物量明显高于低光强下（10μmol· m^－2· s^－1～20μmol· m^－2· s^－1）培养的细胞。而在低光强下，发状念珠藻细胞团几乎与沙面持平，其培养面积在培养100天之后仅为高光强下面积的62．4%。

发状念珠藻细胞的光饱和点为90μmol· m^－2· s^－1，光抑制点为190μmol· m^－2· s^－1，固态培养的细胞由于外面包被有一层胶质，其光饱和点和光抑制点均应有所提高，因此与液体培养的细胞相比需要更强的光照。

6．8．5．4　接种量

分别吸取4ml、8ml和12ml细胞种子液于沙粒培养基上，进行发状念珠藻细胞固态培养，其接种量分别为0．06ml· cm^－2、0．12ml· cm^－2和0．18ml· cm^－2。在培养的初始50天，不同接种量下发状念珠藻细胞的生长有着明显差异，以接种量为0．18ml· cm^－2时发状念珠藻细胞生长最好，接种量为0．12ml· cm^－2时次之。但随着培养时间的延长，不同接种量下细胞生长之间的差异逐渐减小。