免疫胶体金标记技术

第四节　免疫胶体金标记技术

氯金酸（HAuCl₄）在还原剂（如枸橼酸钠等）作用下，金离子还原后聚合成的一定大小的金颗粒。由于静电作用，金颗粒之间相互排斥而悬浮成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金（colloidal gold）。不同粒径的胶体金可带不同的颜色。在碱性条件下，胶体金颗粒表面的负电荷与蛋白质（如抗原或抗体）的正电荷靠静电引力牢固结合，形成免疫金（immunogold）。由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物学活性。

免疫胶体金标记技术（immunogold labelling techique）是用胶体金颗粒标记抗体或抗原（免疫金），以检测未知抗原或抗体的方法。该技术主要利用了胶体金具有高电子密度的特性，最初主要用于免疫电镜技术，以后其应用范围逐步扩展。例如：在免疫组织和细胞化学方面，胶体金标记的抗体可直接用于检测细胞表面和组织切片中的抗原或受体，显微镜下在免疫金结合处可见黑褐色颗粒，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称为免疫金（银）染色法（immunngold staining，IGS/IGSS）；在固相膜免疫测定中，目前，医学检验中常用的是斑点金免疫渗滤实验（dot immunogold filtration assay，DIGFA）和金免疫层析实验（goldimmunochromatographic assay，GICA）等，其共同特点是用硝酸纤维素（nitrocellulose，NC）膜等微孔滤膜为载体，用胶体金标记抗体或抗原，在固相载体膜表面，免疫金在相应的配体处大量聚集，形成肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。如可用于检测HBsAg、HCG和抗双链DNA抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。