试剂的配制

一、试剂的配制

1.擦镜液：乙醚∶无水乙醇＝7∶3。

2.1%碘液：称取1g碘片、2g碘化钾溶于100ml蒸馏水中即可。

3.1%伊红染液：称取1g伊红，溶于蒸馏水中，定容至100ml即可。

4.PBS缓冲液（phosphate　buffer　solution，PBS；pH7.2）：称取NaCl 7.2g、Na₂HPO₄1.48g、KH2PO₄0.43g，加蒸馏水，定容至1 000ml，调pH值到7.2。

5.Carnoy固定液：甲醛与冰醋酸按3∶1体积比混合，现配现用。

6.甲基绿－哌洛宁混合染液：按下列步骤分别配制2%甲基绿和1%哌洛宁溶液，后将2%甲基绿和1%哌洛宁以5∶2的比例混合即可。

（1）0.2mol/L醋酸缓冲液（pH4.8）：取冰醋酸1.2ml加蒸馏水100ml，混匀。再称取醋酸钠（NaAc·2H2O）2.72g溶于100ml蒸馏水中，使用时两种液体按2∶3比例混合。

（2）2%甲基绿染液：称取2.0g去杂质甲基绿粉溶于100ml的0.2mol/L醋酸缓冲液中即可。甲基绿中往往混有影响染色效果的甲基紫，应预先除去。方法是将甲基绿溶于蒸馏水中，放在分液漏斗中加足量的氯仿用力振荡后静置，弃去含有甲基紫的氯仿，再加氯仿反复几次直至氯仿中无甲基紫为止，最后放入40℃温箱中干燥后备用。

（3）1%哌洛宁溶液：称取1g哌洛宁溶于100ml的0.2mol/L醋酸缓冲液中混匀。

7.Schiff试剂（无色品红亚硫酸溶液）：称取1g碱性品红（basic fuchsin）于250ml的烧杯中，加入200ml刚煮沸的蒸馏水，充分搅拌溶解均匀。待溶液冷却到50℃时，过滤到磨口棕色瓶中，加入1mol/L HCl　20ml。冷却到25℃时加入1g偏重硫酸钾（K₂S₂O₅），充分振荡后盖紧瓶塞，放于暗处过夜。次日取出，呈淡黄或近于无色，加中性活性炭0.5g，剧烈振荡1min，过滤后即得无色品红。保存时须盖紧瓶塞，外包黑纸，储存于4℃冰箱中（可保存数月或更长时间）。如液体变红，则不宜再使用。

8.亚硫酸水溶液（漂白液）：10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml，蒸馏水100ml，1mol/L HCl　5ml，混合摇匀，塞紧瓶塞。此溶液在使用前配制，否则会因SO₂的逸出而失效。

9.5%三氯醋酸：称取三氯醋酸0.5g，溶于100ml蒸馏水中。

10.0.1%酸性固绿染液（pH2.2）：称取固绿0.2g溶于100ml蒸馏水中，制成0.2%固绿水溶液，再取比重为1.19的盐酸0.11ml加入到98.9ml蒸馏水中混匀，使用时将0.2%的固绿溶液和盐酸稀释液以1∶1的比例混合均匀即成为0.1%的酸性固绿染液。

11.0.1%碱性固绿染液（pH　8.0～8.5）：同上法配制0.2%的固绿溶液后，称取碳酸钠50.0mg，溶于100ml蒸馏水中制成0.05%碳酸钠溶液，使用时将两种溶液以1∶1比例混合即成0.1%碱性固绿染液。

12.0.1%钼酸铵：取0.1g钼酸铵溶于100ml双蒸水中。

13.0.85%NaCl液：取8.5gNaCl溶于1 000ml双蒸水中。

14.1%联苯胺：取1g联苯胺溶于100ml双蒸水中。

15.0.5%硫酸铜：称取硫酸铜0.5g溶于100ml蒸馏水中。

16.1%番红溶液：称取番红O（safranine O）染料粉1g溶于100ml蒸馏水中。

17.过碘酸乙醇溶液：称取过碘酸（HIO₄·2H2O）0.4ml，量取95%乙醇35ml、0.2mol/L醋酸钠（27.2g＋1 000ml　H₂O）5ml、蒸馏水10ml混匀，避光保存于冰箱，溶液变黄则失效。

18.Schiff乙醇溶液：取Schiff原液11.5ml、1mol/L盐酸（量取85.2ml比重1.19的浓盐酸加蒸馏水至1 000ml）0.5ml、无水乙醇23ml混匀即可。

19.革兰碘液：称取碘化钾1g，溶于50ml蒸馏水中，再加0.5g碘片，使之溶解，最后用蒸馏水稀释至150ml，盛于棕色瓶内，暗冷处保存。

20.2%的兔血红细胞：以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次2　000r/min，离心5min，最后按红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞液。

21.1%鸡血细胞：从健康的鸡翅静脉采血1ml，放入盛有4ml的Alsever溶液瓶中，混匀置4℃冰箱保存备用（1周内使用）。使用前加入0.85%生理盐水离心（1 500r/min，10min），洗涤2次，再用生理盐水配成1%浓度细胞悬液。

22.Alsever溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠（Na₉C₆H5O₇·2H2O）0.89g，柠檬酸（C₆H5O₇·H2O）0.05g，NaCl 0.42g，蒸馏水100ml，调pH至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min。

23.6%淀粉肉汤：称取牛肉膏0.3g、蛋白胨1.0g、NaCl　0.5g，加入到100ml蒸馏水中溶解，再加入可溶性淀粉6.0g，煮沸灭菌，置4℃冰箱保存，用时温水浴溶化。

24.0.3%台盼蓝（trypan blue）染液的配制：台盼蓝0.3g，溶于100ml Hank液中。待溶解后，过滤以去除不溶解的杂质。

25.Hank原液与Hank液配制法：

（1）Hank原液

NaCl　　　　　　　80.0g

Na₂HPO₄·2H2O　　　0.6g

KCl　　　　　　　　4.0g

KH₂PO₄　　　　　　　0.6g

MgSO₄·7H₂O　　　　2.0g

葡萄糖　　　　　　10.0g（如含1份H2O则需11.0g）

CaCl₂（无水）　　　　1.4g

加水至1 000ml，加入防腐剂（氯仿或双抗）。

（2）配制程序

1）称取1.4g CaCl₂，溶于30～50ml的双蒸水中。

2）取1 000ml烧杯及容量瓶各一个，先放入双蒸水800ml于烧杯中，然后按上述配方顺序，逐一称取药品。但必须在前一药品完全溶解后，方可加入下一药品。直到葡萄糖完全溶解后，再将已溶解的CaCl₂溶液加入，加时要边加边混匀，注意不要出现沉淀。最后在容量杯中加水至1 000ml，定容后用滤纸过滤，加入氯仿2ml。充分混匀后，分装，盖紧瓶塞，写好标签，置于4℃冰箱保存。

（3）Hank液配制

Hank原液　　　　　　　　　　100ml

双蒸馏水　　　　　　　　　　896ml

0.5%酚红　　　　　　　　　　4ml

配制好的Hank液，分装，包扎好瓶口，贴好标签，经高压5.28×10⁴Pa（8磅）、30min或6.6×10⁴Pa（10磅）、20min灭菌，灭菌后，置于4℃保存。使用时，加入NaHCO₃少许，调至所需的pH。

26.Ringer溶液：NaCl　0.85g（变温动物用0.65g），KCl　0.25g，CaCl₂ 0.03g，蒸馏水100ml。

27.1%，1/3 000中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热（30～40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。

28.1%，1/5 000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，微热（30～40℃），使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml　Ringer溶液，即成1/5 000工作液，装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。

29.6.0mmol/L磷酸缓冲液（pH 6.8）：

NaH2PO₄·12H2O　　　11.81g

（或NaH₂PO₄·2H₂O　　5.92g）

KH₂PO₄·12H₂O　　　　4.5g

溶解于1 000ml蒸馏水中，用NaHCO₃调至pH6.8。

30.1%Trion　X－100：1ml Trion X－100加99ml M缓冲液配制。

31.M缓冲液（pH 7.2）：

咪唑（imidazole）　　　　　　3.404g

KCl　　　　　　　　　　　　　3.7g

MgCl₂·6H2O　　　　　　　　101.65mg

EGTA（乙二醇双醚四乙酸）　　380.35mg

EDTA（乙二胺四乙酸）　　　　29.224mg

巯基乙醇　　　　　　　　　　0.07ml

甘油　　　　　　　　　　　　297ml

蒸馏水　　　　　　　　　　　加至1 000ml

用1mol/L HCl调pH至7.2，室温保存。

32.3%戊二醛：用88ml 6.0mmol/L磷酸缓冲液将25%戊二醛12ml稀释成3%戊二醛。

33.2%考马斯亮蓝R250染色液：称0.2g考马斯亮蓝R250，加甲醇46.5ml、冰醋酸7.0ml、蒸馏水46.5ml。

34.GKN缓冲液：称取8.0g NaCl，0.4g KCl，1.77g　Na₂HPO₄·2H₂O，0.69g　NaH₂PO₄·H₂O，2.0g葡萄糖，0.01g酚红，溶于1 000ml蒸馏水中。

35.50%（W/V）PEG溶液：取50g　PEG（MW＝4　000）放入100ml瓶中，高压灭菌20min后，待PEG冷却至50～60℃（注意勿让其凝固），加入50ml预热至50℃的GKN液，混匀，置37℃备用。

36.0.25mol/L蔗糖－0.003mol/L CaCl₂溶液

蔗糖　　　　85.5g

CaCl₂　　　0.33g

蒸馏水　　　1 000ml

37.1%甲苯胺蓝（toluidine blue）：称取甲苯胺蓝1g，加蒸馏水100ml。

38.0.1%秋水仙素（colchicine）溶液：称取10mg秋水仙素，加入10ml 0.85%生理盐水。置于棕色瓶中，冰箱保存。

39.2%柠檬酸钠溶液：称取2g柠檬酸钠（柠檬酸三钠，tri－sodium citrate，AR），溶解于100ml蒸馏水。

40.Giemsa染液

（1）贮备液：

Giemsa粉　　　　　　　　　　　1g

纯甘油　　　　　　　　　　　　66ml

甲醇　　　　　　　　　　　　　66ml

先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2h，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般2周后使用为好。

（2）工作液：临用时将贮备液与pH　6.8的磷酸缓冲液按照1∶20混合。

41.改良苯酚品红染液

（1）A液：碱性品红3g，70%乙醇10ml。

（2）B液：A液10ml加5%苯酚水溶液90ml。

（3）C液：B液55ml加45%6ml，37%甲醛溶液6ml。

（4）工作液：C液10ml加45%冰醋酸90ml，山梨酸1.8g混合溶解。

42.0.25%胰蛋白酶－0.02%EDTA混合消化液：

胰蛋白酶粉　　　　　　　　　　　　0.25g

EDTA粉　　　　　　　　　　　　　　20.0mg

0.01mol/L PBS　　　　　　　　　　　100ml

先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1h左右（待彻底溶解，液体呈透明为止），用G₅抽滤、分装，置4℃冰箱中保存。

43.1640培养液（含10%小牛血清）：RPMI－1640粉10.39g加双蒸水至1 000ml，通入适量的CO₂气体，边通入CO₂边慢慢搅拌，使其完全溶解（呈透明）。用NaHCO₃1.5g调pH值到7.2。

1万U/ml双抗10ml，灭活小牛血清110ml。混匀上述液体，立即用G₆抽滤除菌分装，置4℃冰箱备用。

44.青、链霉素溶液：青霉素钠盐（40万U/瓶）5瓶，链霉素（100万U/瓶）2瓶。将两者溶于200ml　0.9%的无菌生理盐水，分装小瓶，－30℃保存。双抗在培养基中的终浓度为100U为宜。

45.EMEM液：

EMEM　　　　　　　　　　90%

犊牛血清　　　　　　　　10%

双抗（1万U/ml）　　　　　加至约100U/ml

3%谷氨酰胺　　　　　　　1ml

7.4%NaHCO₃　　　　　　　调pH至6.8～7.0

46.苯硫脲（phenylthiocarbamide，PTC）1～14溶液：将1.3g/L　PTC蒸馏水浓度定为1号，以后等量对半稀释到14号。

47.硫堇原液的配制：称取硫堇4g，加50%乙醇100ml，滤纸过滤。

48.醋酸钠缓冲液的配制：称取醋酸钠1.94g，巴比妥钠2.94g，蒸馏水溶解至100ml。

49.硫堇工作染色液的配制：取硫堇原液100ml，0.1mol/L盐酸70ml，醋酸钠缓冲液60ml，调pH为5.7。

50.肝素钠（肝素）：称取0.2g肝素钠溶于100ml双蒸水中，浓度为0.2%，高压9.9×10⁴Pa（15磅）20min灭菌。

51.低渗液：称取5.593g　KCl溶于1 000ml双蒸水中即可。

52.固定液（Carnoy固定液）：甲醇∶冰醋酸（3∶1），临时配制。

53.0.02%胰酶：称取200mg胰蛋白酶溶于10ml生理盐水中即为2%的原液，－20℃保存。取0.5ml原液加49.5ml生理盐水混匀，用5% NaHCO₃调pH至7，即可得0.02%工作液，随用随配。

54.0.02%EDTA：用生理盐水配成0.02%EDTA。

55.500μg/ml　BrdU：在分析天平上用无菌小瓶仔细称取BrdU粉4.2mg，加入8.4ml无菌生理盐水，摇匀后即成500μg/ml的BrdU溶液。黑纸包好，置4℃冰箱保存。

56.2×SSC溶液

A液（0.30mol/L氯化钠）：称取17.54g氯化钠溶解在蒸馏水中至1 000ml。

B液（0.030mol/L柠檬酸钠）：称取8.82g柠檬酸钠溶解在蒸馏水中至1 000ml。使用时将A和B两溶液等容量混合即成2×SSC溶液。

57.环磷酰胺母液：称取100mg环磷酰胺溶解在5ml的生理盐水中，配成20mg/ml的溶液。

58.环磷酰胺工作液：用时将环磷酰胺母液稀释成5mg/ml即为工作液。