病毒感染的快速诊断

三、病毒感染的快速诊断

(一)形态学检查

1．包涵体或多核巨细胞的检查　用光学显微镜可直接观察到多核巨细胞或包涵体。如狂犬病病毒感染后可在脑神经细胞浆中检出嗜酸性包涵体。

2．病毒体的检查　含高浓度病毒颗粒的样品，可用电子显微镜直接观察。对病毒含量少的样品可用免疫电镜技术，先将标本与特异性血清混合，使病毒抗原和相应的抗体相互结合形成免疫复合物后，再进行电镜观察;或样品经超速离心后取沉淀物进行电镜观察。电镜下不仅能观察病毒的形态学特征，还能测量病毒的大小。

(二)病毒抗原的检测

通过对标本中特异性抗原的检测，可以早期诊断病毒的感染。对组织或细胞内的病毒抗原可用免疫荧光染色技术、免疫酶染色技术等进行检测;对细胞外的或可溶性的病毒抗原可用凝集反应、酶免疫技术、金标记免疫技术等进行检测。

(三)检测病毒核酸

1．核酸杂交技术　常用于病毒检测的核酸杂交技术有:斑点杂交、原位杂交、DNA印记杂交(Southern blot)和RNA印记杂交(Northern blot)等。

2．凝胶电泳技术可直接用于流行性感冒病毒、乙型肝炎病毒等检测和病毒PCR产物的检测。

3．聚合酶链反应(PCR)　为体外核酸扩增技术，特别适用于难以分离培养和其他方法　不易检测的病毒的诊断。DNA病毒可直接检测。RNA病毒可用反转录PCR(reverse transcription－PCR，RT－PCR)方法　检测。感染者体内游离的病毒核酸含量(又称病毒载量，指血液中病毒核酸拷贝数，即病毒数量)可采用实时荧光定量PCR(Real－time Fluorescent Quantitative PCR，RT－PCR)测定。PCR可以对人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、人巨细胞病毒等进行定量测定，现已广泛应用于病毒的实验室研究、感染早期检测、感染者预后判断和抗病毒疗效观察等。

4．基因芯片　又称DNA芯片或cDNA微矩阵列。根据标记的核酸分子能够与被固化的与之互补配对的核酸分子杂交的原理　，利用光刻合成、高速打印或电定位等技术在硅、玻璃或尼龙膜上按照特定的排列方式固定有大量的基因探针，形成DNA微阵列。样品DNA/RNA通过PCR/RT－PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子与DNA微阵列杂交后，通过荧光扫描器及计算机分析，即可获得样品中大量基因序列及表达的信息。例如可用法国基因芯片病毒检测系统检测DNA病毒。

5．基因测序　包括病毒全基因测序和特征性基因测序。目前对已发现的病毒的全基因测序已基本完成，为开展诊断措施打下了良好的基础。

(四)早期抗体检测

1．IgM型特异性抗体检测　病毒感染者的早期一般会检测到血清中的病毒特异性IgM，可以早期辅助诊断病毒的感染。例如，甲型肝炎病毒IgM的出现提示甲型肝炎病毒的早期感染，孕妇羊水中查到IgM型特异性抗体可诊断某些病毒引起的新生儿先天性感染。IgM抗体的检测有助于感染的早期诊断，但有明显的个体差异。检测技术包括ELISA法和蛋白印迹法、免疫荧光技术法、化学发光法、胶体金等技术。

2．蛋白印迹技术(Western blot)　是将SDS－聚丙烯酰胺凝胶(SDS polyacrylamide gel electrophoresis，SDS－PAGE)蛋白电泳的高分辨力与酶免疫技术的特异性和敏感性相结合的方法　。由于病毒蛋白的分子量和所带电荷不同，在SDS－PAGE上会得到不同的蛋白条带。将蛋白条带转移至硝酸纤维素膜上，进行抗原抗体反应，最后用显色剂显示与相应抗原结合的特异性抗体。本试验是用已知病毒蛋白检测未知病毒特异性抗体的方法　。目前WHO规定该试验作为人类免疫缺陷病毒感染的确认试验，已被广泛应用　。

［杨春艳(第一、二节)郑峰(第三节)］　　

思考题

1．病毒的结构特征与细菌有何不同?

2．病毒的致病性与细菌有何不同?

3．简述干扰素的产生、类型及生物学作用。

4．举例说明病毒的持续性感染包括哪些?

5．病毒感染有哪些快速诊断方法　?