伤寒和副伤寒的血清学检测

二、伤寒和副伤寒的血清学检测

伤寒、副伤寒是由伤寒沙门菌和副伤寒甲、乙、丙沙门菌引起的肠道传染病。临床上多用伤寒、副伤寒的诊断菌液测定患者血清中有无相应的抗体及其效价，从而辅助诊断伤寒和副伤寒。常用的方法有肥达反应和大孔反应板凝集。

肥达反应：用已知的伤寒沙门菌的O抗原、H抗原和副伤寒沙门菌的H抗原与患者血清做试管凝集（见第六章）。正常凝集效价参考值：伤寒沙门菌O抗体效价≥1∶80，H抗体效价≥1∶160，副伤寒A、B、C的H抗体（PA/PB/PC）效价≥1∶80。若急性期、恢复期双份血清效价有4倍以上增长更有意义。但近期接种过伤寒、副伤寒菌苗者，其凝集价亦可升高。

下面介绍大孔反应板凝集。

【原理】

实验原理同肥达反应，较传统的肥达反应结果更清晰。

【试剂与器材】

（1）待检血清。

（2）已知伤寒沙门菌O、H和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌诊断菌液（10×10⁸菌/mL）。为便于观察，每10mL此种稀释菌液中，加入20.0 g/L亚甲蓝溶液5μL。

（3）生理盐水、微量移液器、U形孔反应板、恒温培养箱等。

【操作方法】

（1）取试管1支，加生理盐水1.8mL，待测血清0.2mL，使血清1∶10稀释。

（2）在U形孔反应板上分别标记O、H、甲、乙、丙。

（3）取1∶10稀释的待测血清，分别加入各排的第1孔，每孔0.2mL。再取生理盐水1mL加入试管中，使血清1∶20稀释，混匀后加入各排的第2孔，每孔0.2mL。再取生理盐水1mL加入试管中，依次稀释至各排的第7孔（血清1∶640稀释）。各排第8孔加生理盐水0.2mL，做菌液对照。另设阳性血清对照。

（4）各排分别加相应的染色菌液0.1mL，再补加生理盐水0.1mL。此时各孔液体总量为0.4mL。1～7孔血清最终稀释度为1∶20～1∶1280。

（5）于振荡器上混匀1min，反应板加盖玻板，37℃水浴过夜，次日观察结果。

【结果判断】

阳性结果表现为液体澄清，蓝色细颗粒均匀平摊于整个孔底。阴性结果为蓝色菌体集中于一点，沉积于孔底，与菌液对照相同。以出现50％（++）凝集的血清最大稀释倍数为待检血清效价。

【注意事项】

凝集反应只有在抗原抗体比例适当时，才能出现肉眼可见的反应。一般情况下，随着血清浓度的逐渐稀释，凝集反应越来越弱。但在抗体浓度过高时，反而无凝集现象出现，此为前带现象，出现该情况时，需加大抗体稀释倍数重新试验。

【临床应用】

正常凝集效价参考值与肥达反应相同。