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狗感染性休克

时间:2022-05-08 理论教育 版权反馈
【摘要】:感染性休克是指病原微生物感染所引起的休克,又称为脓毒性休克,是临床上常见的休克类型。革兰阴性菌感染引起的脓毒性休克在临床最为常见。脂多糖在革兰阴性菌脓毒性休克发生中发挥重要作用,给动物注射LPS可导致脓毒性休克类似的表现,称为内毒素性休克。地塞米松是一种糖皮质类激素,其药理作用主要是抗感染、抗过敏、抗风湿,临床使用较广泛,本实验采用地塞米松注射液进行抗炎治疗,观察其对狗感染性休克的治疗作用。

第三节 狗感染性休克

实验目的

(1)复制狗内毒素休克动物模型。

(2)观察内毒素休克时动物的表现及微循环变化。

(3)观察在注射内毒素前和注射内毒素后使用地塞米松所起到的抗休克作用。

实验原理

感染性休克是指病原微生物(如细菌、病毒、真菌、立克次体等)感染所引起的休克,又称为脓毒性休克,是临床上常见的休克类型。革兰阴性菌感染引起的脓毒性休克在临床最为常见。脂多糖(LPS)在革兰阴性菌脓毒性休克发生中发挥重要作用,给动物注射LPS可导致脓毒性休克类似的表现,称为内毒素性休克(endotoxic shock)。地塞米松是一种糖皮质类激素,其药理作用主要是抗感染、抗过敏、抗风湿,临床使用较广泛,本实验采用地塞米松注射液进行抗炎治疗,观察其对狗感染性休克的治疗作用。

实验对象及相关用品

1.实验对象

狗(雌雄不限,体重7.0~10.0kg)。

2.实验相关用品

(1)药品:粗制内毒素(自制),地塞米松注射液,3%戊巴比妥钠溶液,生理盐水,微循环灌流液(含1%明胶的台氏液),0.3%肝素钠生理盐水溶液,95%酒精,Wright-Geimsa染色液。

(2)器材:大动物手术器械一套,磅秤,狗手术台,BL-420生物信号采集分析系统,压力传感器,水检压计,微循环观察装置(解剖显微镜、灌流盒),普通光学显微镜,动脉导管和静脉导管,输尿管导管,载玻片,温度计,100mL烧杯,10mL、20mL、50mL注射器,止血纱布。

观测指标

(1)血流动力学参数:体动脉压平均值(MAP)、脉压(Ps-d)、心率(HR)、中心静脉压(CVP)。

(2)微循环参数:微血管(微动脉、微静脉)内血流速度、微血管口径、毛细血管开放数目/视野、白细胞附壁及嵌塞现象。

(3)血中微聚物(取静脉血作血抹片后用Wright-Giemsa染色液染色,在普通光学显微镜下观察)。

(4)体温(测直肠温度)。

(5)尿量(滴/分)。

(6)皮肤及口腔黏膜颜色。

实验分组

(1)内毒素休克组。

(2)地塞米松+内毒素组。

实验步骤

(1)取成年狗一只、称重后静脉注射3%戊巴比妥钠溶液(30mL/kg)全身麻醉

(2)将动物仰卧固定于实验台上,剪去手术部位被毛,在甲状软骨下做颈部正中切口(长约6cm),分离气管,做倒“T”形切口,插入“Y”形气管插管并固定,保证呼吸通畅;分离左侧颈总动脉,插入动脉导管,经压力传感器(插管前在动脉导管和压力传感器导管部分充盈肝素,以防止凝血后堵塞血压传导通路)与BL-420生物信号采集与分析系统相连,记录MAP、Ps-d、HR;分离右侧颈外静脉,插入静脉导管至上腔静脉入右心房处,接水检压计测量中心静脉压。

(3)在左侧股三角区沿动脉行走方向做一长约3cm的切口,游离左股静脉,穿双线用来取血,作血抹片,观察血中以血小板为主的微聚物。

(4)在狗耻骨联合上方作下腹部正中切口(长约5cm),找到膀胱后,将膀胱从腹腔中拉出,在背面膀胱三角区找到双侧输尿管入口,分离双侧输尿管并插入输尿管插管,记录尿量(滴/分)。

(5)在右侧腹直肌旁做一长约6cm的腹部旁正中切口,钝性分离肌层,打开腹腔后,推开大网膜,找出一段游离度较大的小肠肠袢,轻轻拉出,置于微循环灌流盒内,用解剖显微镜观察肠系膜微循环情况。

(6)将温度计插入直肠,测体温改变。

(7)观察动物一般情况,皮肤黏膜颜色及上述各项指标后,经右下肢皮下静脉在2min内注入粗制内毒素(即灭活大肠杆菌E coli.O111B4)1mL/kg(细菌浓度为1.0×1011个/mL),观察注射粗制内毒素后5、15、30、60和120min时的上述各项指标。

注意事项

(1)尽量减少手术性出血,注意防止血管插管内凝血。

(2)牵拉肠袢要轻,以防引起血压降低。

(3)注射粗制内毒素前应将细菌沉渣摇匀,保证细菌能完全注入静脉。

(4)粗制内毒素最好新鲜培养,以免沉渣过多。

实验报告要点

着重讨论感染性休克的发生、发展机制以及地塞米松对感染性休克的疗效及其作用机制。

思考题

1.内毒素是怎样引起休克的?地塞米松可能通过哪些机制防治内毒素休克?

2.想一想在注射内毒素前、后分别给予地塞米松,其疗效会一样吗?为什么?

3.如果分别测定静脉血和动脉血中的血小板微聚物,结果会有什么差异?这种差异说明什么问题?

附:

1.大肠杆菌粗制内毒素制备方法

(1)将分离的大肠杆菌E coli.O111B4接种到50mL肉汤培养液中,在37℃温箱中培养24h,将5mL肉汤培养菌液加入到预先放有牛肉汤固体琼脂培养基的柯氏皿中,在37℃温箱中培养24h后,培养基表面就长出一层厚厚的菌苔,加入5mL生理盐水,反复摇晃,洗下细菌。

(2)收集含菌的盐水,摇匀后用硫酸钡比浊管比浊得出菌液浓度,调节菌液浓度为1.0×1011个细菌/mL。

(3)将此浓度的菌液高压下灭菌30min,冷却后置于-20℃低温冰箱过夜,次日取出解冻,如此反复冻融三次,即制成粗制大肠杆菌内毒素混悬液,放入0℃冰箱中保存(不宜长期保存)。

2.血中微聚物观察

(1)用硅油硅化过的玻璃注射器从静脉取血样0.2~0.5mL,制作若干血抹片。

(2)待血抹片自然晾干后,用95%乙醇固定5min,再用Wright-Geimsa染色液染色10~15min。

(3)在高倍镜下沿血抹片中央带从左至右观察200个血小板,观察其中聚集的血小板数。

(中南大学湘雅医学院 蒋碧梅)

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