糖原染色（过碘酸-雪夫反应）

【原理】过碘酸-雪夫反应（periodic acid-Schiff reaction，PAS）又称糖原染色，其原理为细胞内含有乙二醇基的多糖类，被过碘酸氧化产生双醛基，此醛基与雪夫试剂（Schiff液）作用，使无色的品红变成紫红色染料，而沉积于含有多糖类的细胞内。

【试剂】

1.固定液　95%乙醇。

2.过碘酸作用液　过碘酸1g溶于蒸馏水100ml中，置4℃保存（临用前配制为好）。

3.雪夫试剂（Schiff液） 400ml蒸馏水煮沸除去CO2，逐渐加碱性品红2.0g，溶解后，冷却至60℃，加1mmol/L HCl 40ml，再加偏重亚硫酸钠（NaHSO3）4g，放置24h后加活性炭1.5g，放置0.5d后过滤，置棕色瓶中，于4℃保存。

4.20g/L甲绿溶液或1%亚甲蓝。

【操作】

1.新鲜或陈旧血片、骨髓片用固定液固定10min，取出，待干。

2.滴加过碘酸作用液，作用10min，水洗，待干。

3.浸入Schiff液30min，水洗。

4.用20g/L甲绿复染5～10min或1%亚甲蓝1～2min，水洗，待干，用油镜镜检。

【注意事项】

1.Schiff液变红即不能再用，以免出现假阳性反应。

2.配制Schiff液器具须十分清洁干燥，试剂置于棕色瓶内4℃保存。

3.已染色的标本不能久置，应1周内观察结果。

4.固定液可用乙醇、甲醇或甲醛，但以95%乙醇固定后阳性结果最明显。

5.浸入Schiff液前，染色的片子一定要待干，否则影响染色效果。

【结果】

1.结果判断　胞质内染成红色或紫红色，呈颗粒状、块状或弥漫状物质为阳性反应，阳性程度判断标准如下：

0分（-）：胞质无色，无颗粒状物质。

1分（+）：胞质淡红色或有少数红色阳性颗粒，阳性颗粒常少于10个。

2分（++）：胞质红色或有红色阳性颗粒，阳性颗粒多于10个。

3分（+++）：胞质暗红色或有粗大红色阳性颗粒，可呈红色块状。

4分（++++）：胞质紫红色或呈粗大红色块状。

2.结果报告　报告阳性率与积分值，其计算方法同中性粒细胞碱性磷酸酶染色。

【正常血细胞的染色反应】（图3-6）。

1.粒细胞系统　原始粒细胞呈阴性或阳性反应（分化差的原始粒细胞呈阴性反应，分化好的原始粒细胞呈阳性反应），自早幼粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，阳性反应的强度随细胞发育成熟而增强；嗜酸性粒细胞的颗粒不着色，胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒呈阳性反应，胞质不着色。

图3-6　正常血细胞PAS染色
1.原始粒细胞和早幼粒细胞（+）；2.中幼粒和晚幼粒细胞（++）；3.中性杆状核和分叶核粒细胞（++++）；
4.嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞（+++）；5.单核细胞（+）；6.淋巴细胞（+）；7.中幼红和晚幼红细胞（-）

2.红细胞系统　幼红细胞和红细胞均呈阴性反应。

3.单核细胞系统　分化差的原始单核细胞呈阴性反应，幼稚单核细胞和单核细胞可呈阳性反应，大多数阳性物质呈细颗粒状，有时细胞边缘的阳性颗粒较粗大。

4.淋巴细胞系统　淋巴细胞大多呈阴性反应，但少数淋巴细可呈阳性反应（阳性率常<20%），阳性物质呈粗颗粒状或块状。

5.巨核细胞系统　巨核细胞和血小板均呈阳性反应，阳性物质呈细颗粒状或块状（图3-7）。

6.其他细胞　浆细胞常呈阴性反应，少数可呈阳性反应，阳性物质呈细颗粒状；巨噬细胞呈阳性反应，阳性物质也呈细颗粒状。

【临床意义】

1.用于鉴别红细胞系统疾病　红白血病和骨髓增生异常综合征时幼红细胞可呈阳性反应（图3-8），缺铁性贫血和珠蛋白生成障碍性贫血时幼红细胞也可呈阳性反应，而巨幼细胞贫血、再生障碍性贫血和溶血性贫血时幼红细胞呈阴性反应。

图3-7　AML-M7原始巨核细胞PAS染色阳性

图3-8　红白血病幼红细胞PAS染色阳性

2.用于鉴别白细胞系统疾病　急性淋巴细胞白血病时原始和幼稚淋巴细胞呈阳性反应，阳性物质呈粗颗粒状或块状，而传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症时的淋巴细胞呈阴性或弱阳性。急性粒细胞白血病时原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应，阳性物质呈细颗粒状或淡红色弥漫状。急性单核细胞白血病时原始和幼稚单核细胞可呈阳性反应，阳性物质呈细颗粒状，有时细胞边缘的阳性颗粒较粗大。

3.用于鉴别其他细胞　戈谢细胞呈强阳性反应，而尼曼-匹克细胞呈弱阳性或阴性反应；不典型的巨核细胞呈强阳性反应，而霍金奇细胞（R-S细胞）呈阴性或弱阳性反应；转移性腺癌细胞呈强阳性反应。