蛙心灌流观察体液因素对心脏活动的影响

【实验目的】 学习离体蛙心灌流方法，观察某些因素对心脏活动的影响。

【实验原理】 心脏离体以后进行人工灌流，如灌流液成分、性质同其内环境一致，则心脏仍可保持自动有节律地兴奋和收缩；如改变灌流液中离子浓度比例或给予某些药物，均可引起心脏活动的改变。

【实验用品】 蛙或蟾蜍、生物机能实验系统、蛙类手术器械一套、蛙板、蛙心捕管、蛙心夹、长滴管、烧杯、铁支架、肌夹、棉线、张力换能器、任氏液、0.65％ NaCl溶液、2％Ca Cl2溶液、1％KCl溶液、3％乳酸溶液、2.5％ NaHCO3溶液、0.01％去甲肾上腺素溶液、0.01％乙酰胆碱溶液。

【实验步骤】

1．离体蛙心插管

（1）取蛙或蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，将其仰卧固定于蛙板上，自剑突向上呈“V”形剪开皮肤和胸骨，并剪开心包膜，充分暴露心脏。

（2）在静脉窦下方穿一线供结扎静脉备用，在主动脉干下方穿一线作固定插管备用，在主动脉左侧分支下方穿一线并将其结扎。

（3）左手持线固定主动脉，用眼科剪在左主动脉近动脉球处剪一斜口，将盛有少量任氏液的蛙心插管自斜口插入主动脉球，然后将插管稍稍后退，在心室收缩时向心室后壁方向经主动脉瓣口插入心室腔内。此时可见插管中的液面随心跳而上下移动。用滴管吸去插管中的血液，更换新鲜任氏液，以免产生血凝块堵塞插管口。用线将动脉结扎并固定在插管的小玻璃钩上。

（4）轻轻提起插管和蛙心，结扎静脉窦下方的备用线。剪去结扎线的远心端所有组织，游离蛙心。更换新鲜任氏液多次，并始终保持灌流液液面高度恒定（1～2cm）。

2．连接实验装置 将蛙心插管固定于铁支架上，用蛙心夹于心舒期夹住心尖并连于张力换能器，再与生物机能实验系统连接（实验图3-3），选择系统内蛙心灌流实验项目。

3．观察项目

（1）观察、描记正常心脏活动曲线。

（2）蛙心插管内换等量的0.65％ NaCl溶液，观察心脏活动曲线变化。作用明显后，立即用新鲜任氏液换洗2～3次，直至心脏活动曲线恢复正常后进行下一实验项目的观察。

（3）向蛙心插管内加入2％ Ca Cl2溶液1～2滴，观察及换液方法同上。

（4）向蛙心插管内加入1％ KCl溶液1～2滴，观察及换液方法同上。

（5）在蛙心插管内加入0.01％肾上腺素溶液1～2滴，观察及换液方法同上。

（6）在蛙心插管内加入0.01％乙酰胆碱溶液1～2滴，观察及换液方法同上。

实验图3-3 蛙心灌流装置示意图

（7）在蛙心插管内加入3％乳酸溶液1～2滴，当作用出现后立即进行下一步。

（8）在蛙心插管内加入2.5％NaHCO3溶液1～2滴，观察心脏活动变化。

【注意事项】

1．蛙心插管及结扎时，勿损伤心脏及静脉窦等。

2．在每项实验观察前，应保持蛙心插管内液面在同一高度。

3．药物作用明显时应立即用新鲜任氏液换洗，直至心脏活动曲线恢复正常后再做下项实验。

4．分别用不同滴管加入各种溶液，以免影响实验结果。