影响预测准确性的因素

15.5.2.1 K i和半数抑制浓度(IC50)

一般来说，在求算Ki和IC50时，通常以代谢物的形成速度来表示反应活性;如果代谢物有酶抑制作用，则以底物的消耗量表示反应活性。为提高准确率，底物的消耗量应该＞20%。测定时间应该选择在试验初期，此时代谢物的形成速率与酶浓度和孵育时间成线性。

受试药如果是高亲脂性酶抑制剂，则微粒体中蛋白成分可能非特异的吸附受试药而使Ki或IC50偏高。另外，底物与孵育系统中某些成分也可以非特异结合影响实测的Ki或IC50。底物和抑制剂的代谢消耗也将影响Ki的准确性。

由于体外肝微粒体试验中，底物浓度一般远远超过治疗时体内酶微环境中的药物浓度。药物在较高浓度时，酶对底物的选择性降低，可能有多种CYP参与药物代谢;而体内酶的微环境中药物浓度极低，药物的代谢以某个CYP为主。这种情况下，在底物浓度较高时，受试药作为某个具体酶的抑制剂，不能对所有参与底物代谢的CYP同工酶都产生抑制效应，因此试验得到的Ki值会偏高。有学者建议采用重组的人CYP450酶来进行相关研究。但是，重组的人CYP同工酶体外试验缺乏体内试验的敏感内环境，缺乏重要的调控蛋白、pH环境和细胞因子等，也不能模拟真实的体内代谢环境。因此，尽可能降低底物药物浓度是获得相对准确的Ki值的关键。

另外，CYP同工酶如CYP3A4具有底物依赖性，即体外抑制剂和CYP3A4敏感探针底物之间的相互作用，并不能完全代表抑制剂和其他CYP3A4底物之间的相互作用情况。比如酮康唑对CYP3A4的抑制作用，以不同的底物如睾酮－6β－羟基化或咪达唑仑－1－羟基化为标准，其IC50在0.0037～0.18μmoL·L－1之间变化，相差近50倍。因此，利用体外CYP3A4代谢抑制数据预测体内药物相互作用时，推荐使用尽可能多的探针底物的相关数据的均值或公认值。

15.5.2.2　药物半衰期和疗程

研究发现，药物半衰期和疗程也影响预测的准确性。比如酮康唑、伊曲康唑和氟康唑的消除半衰期分别为8 h、32 h和24 h，特比萘芬为16.5天。酮康唑停药后约24～48 h就丧失了代谢抑制能力，而伊曲康唑、氟康唑和特比萘芬则需要数周的时间消除对酶的抑制。研究发现，特比萘芬对右美沙芬－O－去甲基反应(CYP2D6)的抑制Ki=0.035 mmol·L－1。特比萘芬250 mg/d服用4周后，抑制CYP2D6底物的消除率，下降分数为99%，停药2周后达到90%，停药8周后，特比萘芬的血浆浓度仍然＞Ki值3倍，消除率下降分数仍然＞75%。

目前，利用体外数据定量预测体内药物代谢酶抑制所导致的相互作用程度，方法学上是可行的，但是由于涉及具体的数学模型公式参数的选择，学者们仍然在探索和摸索，以期将预测结果更准确和可靠。迄今为止，选择抑制剂的肝灌注血药浓度［I］in计算得到的［I］/Ki能够确定真阴性，消除假阴性，真阳性也能很好地被预测，尽管假阳性率很高，但这可以为进一步进行体内研究提供信号和线索。

利用肝灌注血药浓度［I］in预测体内相互作用，在药物筛选中有特殊意义，它可以排除假阴性预测。然而，目前的分析完全依靠经验，也忽视了肠内代谢相关的相互作用及特定底物/抑制剂的性质，因此必须将预测结果看作是相互作用研究的起始步骤。对于真阳性结果的预测，将需要从全球大样本量分析中获得重要的个体差异证据。为了定量预测CYP抑制性相互作用，在计算［I］/Ki值时需要考虑其他因素的作用，如肝脏对药物的摄取或转运、多种代谢消除途径、CYP3A4/5的多位点动力学影响及底物的非线性动力因素。

【思考题】

1.药物相互作用有哪几种类型，各有何特点?

2.试述CYP3A4在药物相互作用中的意义，其表现出有临床意义的底物、抑制剂和诱导剂分别有哪些?

3.P糖蛋白(P－gp)可能介导哪些药物相互作用?

4.试述哪些分析技术可能用于药物相互作用研究?