生物检定法

生物检定法的基本原理是在体内和体外组织活细胞对被测生物技术药物的某种特异反应，通过剂量(或浓度)效应曲线对生物技术药物定量分析(绝对量或比活性单位)。将生物技术药物的生物活性如抗菌、抗肿瘤、降压、凝血等药理学作用，作为生物检定法的观察指标用于药动学研究。中国药典中以生物检定法测定肝素的效价，通过比较标准品与供试品延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝结时间的作用，将标准品或供试品不同浓度的稀释液加入清洁干燥的小试管中，每种浓度不得少于3管，各浓度的试管支数相等。取刚抽出的兔血或血浆适量，分别注入小试管中，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间。将小试管置于37℃±0.5℃恒温水浴中，从动物采血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过3 min，观察并记录各管的凝结时间。药典中还以生物检定法测定胰岛素的效价，通过比较胰岛素标准品与供试品引起小鼠血糖下降的作用，将健康小鼠分组后，各组小鼠分别自皮下注入一种浓度的标准品或供试品稀释液，每组0.2～0.3 mL，但各组的注射体积应相等。注射后40 min，按给药顺序分别自眼静脉丛采血，用合适的方法，如葡萄糖氧化酶－过氧化酶法测定血糖值。

整体生物分析测定过程对实验条件的要求较严格，操作程序较多。细胞分析法常以细胞增值、变异和细胞毒性为观察终点。与免疫分析方法相似，生物分析法也受到代谢产物、生物基质、血清中抑制因子的干扰以及种属特异性的限制，也不能提供关于分析药物体内降解过程的信息。柴彪新等尝试用两种免疫学方法及生物检定法测定血浆肿瘤坏死因子衍生物，比较3种方法的研究结果后认为，免疫学方法与生物检定法有一定的可比性，相对于其他的方法来说，免疫学方法测定的结果可能更接近于生物检定法。