生物学方法

生物学方法(biochemical approach)包括生物转化前体药物的合成(synthesis ofbio-convertible prodrugs);皮肤代谢抑制剂的合用(coadmin-istration of skin metabolism inhibitor)等。

实例5-1苦参碱和氧化苦参碱传递体制备研究

【文献来源:王玥月，杨建宏，戴贵东，李江英，张亚军*.同时包载苦参碱和氧化苦参碱的传递体制备研究.中成药，2013，35(11):2399-2403】

1.空白传递体的制备

称取处方量磷脂、去氧胆酸钠和胆固醇溶于30mL甲醇-二氯甲烷(2∶1)混合溶液，转移至1000mL圆底烧瓶中，40℃条件下减压旋转除去溶剂，得到干膜;室温下抽真空1h，10mL柠檬酸缓冲液(500 mmol/L，pH值为4.0)水化，振摇，使瓶壁上的膜溶散后，通过0.2μm微孔滤膜2次，即得空白传递体混悬液。

2.pH梯度法载药

取空白传递体混悬液8.0mL，加2.0mL苦参碱和氧化苦参碱混合水溶液(每毫升含苦参碱和氧化苦参碱均为5mg)，用氢氧化钠溶液(1 mol/mL)调外水相pH值，于40℃水浴中孵化，取出后迅速冷却，即得同时包载苦参碱和氧化苦参碱的传递体。

3.正交设计考察影响传递体包封率的因素

(1)空白传递体处方组成优化预实验以磷脂、去氧胆酸钠为基本处方制备苦参碱和氧化苦参碱传递体，加入适量胆固醇能提高药物包封率。为了综合考察处方因素对药物包封率的影响，以磷脂质量浓度(A，g/mL)、磷脂和去氧胆酸钠的用量比(B)、去氧胆酸钠和胆固醇的用量比(C)3个因素为变量，选择不同水平包封率为考察指标，采用L9(34)正交表进行试验。

结果表明，影响苦参碱包封率的大小顺序为B＞C＞A;磷脂和去氧胆酸钠的用量比(B)对包封率有显著影响(P＜0.01);去氧胆酸钠和胆固醇的用量比(C)增大，包封率提高，与胆固醇增加脂质体的刚性，使膜层稳定有关，但胆固醇用量增大会影响传递体的变形能力，故选择去氧胆酸钠和胆固醇的用量比为5∶1;磷脂的质量浓度对包封率影响较小，可能与下一步pH载药工艺中药脂比的相应改变有关，由于7%磷脂形成干膜时梨形瓶底部有磷脂堆积现象，故选择磷脂质量浓度为5%。氧化苦参碱的包载结果与苦参碱类似，影响包封率的大小顺序为B＞C＞A，磷脂和去氧胆酸钠的用量比(B)对包封率有显著影响(P＜0.05)。据此，确定空白传递体的处方组成为A2B1，C2即5%磷脂(g/mL)、磷脂和去氧胆酸钠的用量比为5∶1、去氧胆酸钠和胆固醇的用量比为1∶1。

(2)pH梯度载药工艺参数考察在pH梯度载药工艺环节，影响包封率的主要因素有药物-脂质比例、跨膜pH梯度、内水相缓冲能力(介质浓度)及孵育时间和温度等。由于载药量大小影响脂质体内水相的缓冲能力，导致跨膜pH梯度的改变，不宜将药脂比与内水相介质浓度在同一正交设计中考察，故以药物总量-脂质比例(A)、外水相pH值(B)、孵化时间(C)3个因素为变量，采用L9(34)正交表进行试验，包封率为考察指标。

结果表明，影响苦参碱包封率的大小顺序为B＞A＞C;外水相pH值(B)对苦参碱包封率有显著影响(P＜0.05);药物总量-脂质比例(A)增大，苦参碱的包封率降低;孵化时间(C)对苦参碱包封率影响较小。影响氧化苦参碱包封率的大小顺序为B＞C＞A，与苦参碱实验结果不同的是，孵化时间(C)对于氧化苦参碱的包封率有较大影响。据此，得苦参碱和氧化苦参碱传递体优选的工艺条件为A1B3C2，即药脂比为1∶20，外水相pH值为8.0，孵化时间1.5h。按优选的处方和工艺，制备3批同时包载苦参碱和氧化苦参碱的传递体，苦参碱的包封率分别为59.53%、63.76%、64.18%，氧化苦参碱的包封率分别35.81%、31.64%、34.09%。

4.苦参碱和氧化苦参碱的相互影响

传递体载药总量不变，按照优化的处方和工艺，制备包载不同比例苦参碱和氧化苦参碱的传递体，测定各传递体的药物包封率。结果表明，改变传递体中苦参碱和氧化苦参碱的组成比例，二者的包封率无显著性差异(P＞0.05)。因此，在优化的处方和工艺条件下，同时包载苦参碱和氧化苦参碱的传递体形成过程中，药物相互之间对包封率无显著影响。