性腺激素测定

一、概 述

性激素(gonadal hormone)主要由性腺分泌,肾上腺皮质可合成少量性激素。性激素包括雄性激素和雌性激素,后者又可分为雌激素和孕激素。

1.雄性激素以睾酮为主,其生理功能主要有以下几方面。

(1)诱导胚胎期及出生后男性内、外生殖器官的分化形成和发育,参与男性性功能及第二性征的出现和维持。

(2)促进清蛋白等蛋白质合成的同化作用,使机体呈正氮平衡,对男性青春期的身材迅速长高起重要作用。

(3)促进肾合成促红细胞生成素,刺激骨髓造血。

2.雌激素的主要生理功能

(1)促进女性生殖器官的形成和发育,参与第二性征的出现和维持,并与孕激素协同形成月经周期。

(2)广泛的代谢调节作用,包括促进肝合成多种转运蛋白,如CBG、TBG、SHBG等;降低血浆胆固醇;促进HDL生成;促进钙盐骨沉积,促进肾小管重吸收钠和水等。

孕激素的作用主要是与雌激素协同作用于子宫内膜,形成月经周期,并在排卵后使基础体温升高;松弛子宫及内脏平滑肌;促进乳腺腺泡发育;促进水钠排泄等。

二、病人准备

1.药物

(1)一般用于治疗动脉硬化、卒中、脂类代谢失常、高血压、冠心病和血液循环障碍性疾病的药品中均含有生物素,而电化学发光免疫分析法的试剂中有生物素化的抗体参与,因此,接受高剂量生物素(>5mg/d)治疗的病人,至少要等最后1次摄入生物素8h后才能采血。

(2)多数避孕药可抑制内源性雌二醇的水平。

(3)绝经后的女性每周2次经皮肤吸收0.1mg雌二醇,6周后可使FSH明显下降。

(4)在保证患者安全的情况下,限制所有类固醇激素和脑垂体激素的摄入,如果这些激素需要持续使用,要在试验要求上注明这一点以及她的月经周期(是否绝经)。

(5)注射睾酮会导致男性和女性的血浆FSH、LH浓度降低。

(6)青春期前的孩子静脉注射1μg/kg生长激素释放激素后,FSH浓度有个短期的轻微上升。

(7)在给予绝经期促性腺激素后会导致血浆FSH升高。

(8)注射多巴胺对LH的测定有影响,并抑制催乳素的释放,在检测前应停用。

(9)在黄体后期静脉注射前列腺素F2α会使孕酮浓度减低。

(10)荧光素尤其是视网膜血管造影所使用的荧光素在造影结束后至少在体内停留48h,肾功能不全者停留时间更长,其荧光素可导致结果的假性升高或降低。

(11)注入精氨酸或麻醉后30min可见催乳素显著增高,随后降低。

2.饮食

(1)正常饮食。

(2)禁食超过48h可使FSH、PRL下降。

3.影响因素

(1)如果是女性患者,请注意采血时处于哪个生理周期(月经期、黄体期、排卵期),以便分析结果时与其正常参考范围对照;如果是男性患者一定要标明年龄,每个年龄段的激素分泌不同。

(2)手术会使脑垂体后激素释放被抑制,垂体激素均降低。

(3)绝经后、卵巢切除术后、排卵期、更年期FSH会出现不同程度的升高。

(4)LH浓度随着男性年龄的增长,其睾酮浓度无论是否降低LH都增加。

三、标本采集

1.采集时间 清晨空腹采集静脉血4ml于普通试管(或抗凝管)中,4h内送检。女性患者请注意采集标本时的生理周期、性别、年龄。

2.标本保存 抗凝剂一般使用EDTA、肝素、枸橼酸钠、草酸-K。实验室收到标本后分离血清或血浆,待测或保存于2～8℃不超过24h,若长期保存应1次冻存于-20℃至测定前。

四、注意事项

1.在月经周期中和妊娠以后,孕酮在血中浓度的变化较大,此点应加以注意。

2.由于血清中黄体生成素和促卵泡激素呈脉冲式分泌,变化较大,1次测定结果难以解释。

3.妊娠时高水平的绒毛膜促性腺激素可影响LH、FSH的结果。

五、试验方法及正常参考范围

(一)雌二醇(estradiol,E2)的检测

1.时间分辨荧光免疫分析法 本法是铕标记E2和待测血清E2竞争结合大鼠抗E2抗体上的结合位点。标准品、质控品和待测血清中的E2抑制铕标记E2和抗体的结合,96孔反应板上包被的是可以和抗E2抗体抗原复合物结合的抗大鼠IgG。解离增强液将铕离子从铕标记E2上解离下来和增强液中的有效成分形成强荧光螯合物;荧光强度和样本中的浓度成反比。

正常参考范围 女性卵泡期:0.08～2.1nmol/L

排卵期:0.7～2.1 nmol/L

黄体期:0.08～0.85 nmol/L绝经期:0～0.09 nmol/L

男性:0～0.13 nmol/L

2.化学发光免疫分析法 待测抗原(E2)和碱性磷酸酶标记抗原(ALP-E2)竞争结合相应的抗体(Ab)。由于ALP-E2和Ab为一定量的,E2的量越多,ALP-E2-Ab的量越少。当反应达平衡时,加入联有羊抗鼠IgG抗体的磁性颗粒,可捕获ALP-E2-Ab抗原抗体复合物,在磁场的作用下自行沉淀。经洗涤并吸弃废液后加入发光底物AMPPD,后者在ALP的作用下,迅速发出稳定的光量子。光子的量与ALP-E2-Ab的量成正比,与E2的量成反比。以光量子的产出作为纵坐标,E2的浓度作为横坐标绘制标准曲线。将待测标本同样处理即可于标准曲线上查得E2的浓度。

正常参考范围　女性卵泡期:0.18～0.27nmol/L

　　　　　　　　　排卵期:0.34～1.55nmol/L

　　　　　　　　　黄体期:0.15～1.08nmol/L

　　　　　　　　　绝经期:0.01～0.14 nmol/L

　　　　　　　男性:0.19～0.24 nmol/L

3.电化学发光免疫分析法 待测抗原(E2)、钌标记的E2竞争性地与生物素化的抗E2单克隆抗体结合,待测抗原(E2)的量与钌标记的E2和生物素化抗E2单克隆抗体所形成的免疫复合物的量成反比,加入链霉亲和素包被的磁性微粒捕获上述免疫复合物,在磁场的作用下,磁性微粒被吸附至电极上,各种游离成分被吸弃。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的E2含量成反比。

正常参考范围　女性卵泡期:0.09～0.72nmol/L

　　　　　　　　　排卵期:0.24～1.51nmol/L

　　　　　　　　　黄体期:0.15～0.96nmol/L

　　　　　　　　　绝经期:0.04～0.15 nmol/L

　　　　　　　男性0.05～0.22 nmol/L

(二)促卵泡生成激素(follotropin,FSH)的检测

1.时间分辨荧光免疫分析法 采用固相双位点荧光分析法,用两种单克隆抗体(单抗)可分别结合FSH分子的两个不同亚基的特性。将标准品、质控品或待测血清中的FSH首先以β亚基与固相的单抗结合,然后加入铕标记的单抗使其与FSH的α亚基结合。所产生的复合物的量与反应体系中的FSH的量成正比。加入解离增强液,将铕离子从标记的抗体上解离下来,与增强液中的有关成分形成荧光螯合物微囊,反应体系中的荧光强度与FSH的浓度成正比。

正常参考范围　女性青春期前:<2.5U/L

　　　　　　　　　　卵泡期:2.4～9.3 U/L

　　　　　　　　　　排卵期:3.9～13.3 U/L

　　　　　　　　　　黄体期:0.6～8.0 U/L

　　　　　　　　　　绝经期:31～134 U/L

　　　　　　　男性青春期前:<2.0U/L

　　　　　　　　　　　　成年人:1～10.5U/L

2.化学发光免疫分析法 待测抗原(FSH)与鼠抗人FSH单克隆抗体(m Ab)及碱性磷酸酶(ALP)标记的羊抗人FSH抗体(ALP-g Ab)结合,形成m Ab-FSH-ALP-g Ab双抗体夹心复合物;当反应达平衡时,再加入联有羊抗鼠IgG抗体的磁性颗粒,即可捕获上述的抗原抗体复合物,在磁场的作用下自行沉淀。经洗涤并吸弃废液后加入发光底物AMPPD,在ALP的作用下迅速发出稳定的光量子。光量子与抗原抗体复合物的量(FSH的量)成正比。

正常参考范围　女性卵泡期:5～20U/L

　　　　　　　　　排卵期:12～30U/L

　　　　　　　　　黄体期:6～15U/L

　　　　　　　　　绝经期:20～320 U/L

　　　　　　　成年男性:5～20U/L

3.电化学发光免疫分析法 待测标本、生物素化的抗FSH单克隆抗体与钌标记的抗FSH另一位点单克隆抗体在反应体系中混匀,形成双抗体夹心抗原抗体复合物。加入链霉亲和素包被的磁性微粒与之结合,在磁场的作用下,捕获抗原抗体复合物的磁性微粒被吸附至电极上,各种游离成分被吸弃。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的FSH含量成正比。

正常参考范围　女性卵泡期:3.5～12.5 U/L

　　　　　　　　　排卵期:4.7～21.5U/L

　　　　　　　　　黄体期:1.7～7.7 U/L

　　　　　　　　　绝经期:25.8～134.8U/L

　　　　　　　成年男性:1.5～12.4U/L

(三)促黄体激素(leuteinizing hormone,LH)的检测

1.时间分辨荧光免疫分析法 采用固相双位点荧光分析法,用两种单克隆抗体(单抗)可分别结合LH分子的两个不同亚基的特性。将标准品、质控品或待测血清中的LH首先以β亚基与固相的单抗结合,然后加入铕标记的单抗使其与LH的α亚基结合。所产生的复合物的量与反应体系中的LH的量成正比。加入解离增强液,将铕离子从标记的抗体上解离下来,与增强液中的有关成分形成荧光螯合物微囊,反应体系中的荧光强度与LH的浓度成正比。

正常参考范围　女性卵泡期:1.6～9.3 U/L

　　　　　　　　　排卵期:13.8～71.8 U/L

　　　　　　　　　黄体期:0.5～12.8 U/L

　　　　　　　　　绝经期:15～640 U/L

　　　　　　　成年男性:1.8～8.4U/L

2.化学发光免疫分析法 待测抗原(LH)与鼠抗人LH单克隆抗体(m Ab)及碱性磷酸酶(ALP)标记的羊抗人LH抗体(ALP-g Ab)结合,形成大的抗原抗体复合物m Ab-LH-ALP-g Ab;当反应达平衡时,再加入联有羊抗鼠IgG抗体的磁性颗粒,即可捕获上述的抗原抗体复合物,在磁场的作用下自行沉淀。经洗涤并吸弃废液后加入发光底物AMPPD,在ALP的作用下迅速发出稳定的光量子。光量子与抗原抗体复合物的量(即LH的量)成正比。

正常参考范围　女性卵泡期:2～30 U/L

　　　　　　　　　排卵期:40～200U/L

　　　　　　　　　黄体期:0～20U/L

　　　　　　　　　绝经期:40～200 U/L

　　　　　　　成年男性:5～20U/L

3.电化学发光免疫分析法 待测标本、生物素化的抗LH单克隆抗体与钌标记的抗LH另一位点单克隆抗体在反应体系中混匀,形成双抗体夹心抗原抗体复合物。加入链霉亲和素包被的磁性微粒与之结合,在磁场的作用下,捕获抗原抗体复合物的磁性微粒被吸附至电极上,各种游离成分被吸弃。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的LH含量成正比

。

正常参考范围　女性卵泡期:2.4～30 U/L

　　　　　　　　　排卵期:14.0～95.6 U/L

　　　　　　　　　黄体期:1.0～11.4 U/L

　　　　　　　　　绝经期:7.7～58.5U/L

　　　　　　　成年男性:1.7～8.6U/L

(四)孕酮(progesterone,P)的检测

1.时间分辨荧光免疫分析法 是铕标记P和待测血清中P竞争性与抗P抗体结合的固相荧光免疫法。96孔反应板上包被的是第二抗体,可以和P抗原-抗P抗体复合物结合。整个反应只需一步温育。最后加入解离增强液将铕标记P上的铕离子释放到溶液中,形成高效的荧光复合物,其荧光强度和样本中P的浓度成反比。

正常参考范围　女性卵泡期:1.3～3.4 nmol/L

　　　　　　　　　排卵期:1.7～2.4 nmol/L

　　　　　　　　　黄体期:11.6～68.9 nmol/L

　　　　　　　　　绝经期妇女:0～3.0 nmol/L

　　　　　　　成年男性:0.7～3.0nmol/L

2.化学发光免疫分析法 采用竞争原理,即待测抗原(P)与过量的碱性磷酸酶标记抗原(ALP-P)在反应体系中竞争性地结合特异性抗P抗体(Ab)的结合位点。试验时,检样中P和ALP-P与Ab进行竞争性结合反应,由于ALP-P和Ab为一定量的,检样中P的量越多, ALP-P-Ab的量就越少。当反应达平衡时,反应体系中光子的产出量与ALP-P-Ab的量成正比,而与P的量成反比。

正常参考范围　女性卵泡期:0.2～1.2μg/L

　　　　　　　　　排卵期:0.6～2.6μg/L

　　　　　　　　　黄体期:5.8～22.1μg/L

　　　　　　　　　绝经期:0.2～0.9μg/L

　　　　　　　成年男性:0.4～1.1μg/L

3.电化学发光免疫分析法 待测抗原(P)、钌标记的P竞争性地与生物素化的抗P单克隆抗体结合,待测抗原(P)的量与钌标记的P和生物素化的抗P单克隆抗体所形成的免疫复合物的量成反比,加入链霉亲和素包被的磁性微粒与后者结合,在磁场的作用下,结合部分吸附至电极上,吸弃未结合部分。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的P含量成反比。

正常参考范围 女性卵泡期:0.6～4.7 nmol/L

　　　　　　　　　排卵期:2.4～9.4nmol/L

　　　　　　　　　黄体期:5.3～86.0nmol/L

　　　　　　　　　绝经期:0.3～2.5 nmol/L

　　　　　　　成年男性:0.7～4.3nmol/L

(五)睾酮(testosterone,T)的检测

1.时间分辨荧光免疫分析法 是铕标记T和待测血清中T竞争性与抗T抗体结合。96孔反应板上包被的是第二抗体,可以和T抗原-抗T抗体复合物结合。整个反应只需一步温育。最后加入解离增强液将铕标记T上的铕离子释放到溶液中,形成高效的荧光复合物,其荧光强度和样本中T的浓度成反比。

正常参考范围　女性:0～3.0 nmol/L

　　　　　　　男性:8.7～33nmol/L

2.化学发光免疫分析法 待测血清中的T、碱性磷酸酶标记的T(ALP-T)与特异性抗T抗体(Ab)进行竞争性结合反应,由于ALP-T和Ab为一定量的,T的量越多,ALP-T-Ab的量就越少。而光子的量与ALP-T-Ab的量成正比,与T的量成反比。

正常参考范围　女性:0.18～1.78 nmol/L

　　　　　　　男性:9.4～37.0nmol/L

3.电化学发光免疫分析法 待测抗原(T)、钌标记的T竞争性地与生物素化的抗T单克隆抗体结合,待测抗原(T)的量与钌标记的T和生物素化的抗T单克隆抗体所形成的免疫复合物的量成反比,加入链霉亲和素包被的磁性微粒与后者结合,在磁场的作用下,结合部分吸附至电极上,吸弃未结合部分。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的T含量成反比。

正常参考范围　女性:0.22～2.9 nmol/L

　　　　　　　男性:9.9～27.8nmol/L

　　　　　　　儿童:0.42～38.5 nmol/L

(六)催乳素(prolactin,PRL)的检测

1.时间分辨荧光免疫分析法 检测PRL的Tr FIA法为固相双位点荧光免疫分析法。两株单克隆抗体(单抗)可分别于PRL分子上的两位点结合,其中一株单抗包被于微孔反应板上。PRL标准品、质控品和待测血清中的PRL与此固相抗体反应,形成抗原抗体复合物。而铕标记的另一株单抗通过和PRL分子的另一位点结合。洗板后加入解离增强液,将铕离子从标记的抗体上解离到溶液中,与增强液中的有关成分形成荧光螯合物微囊,反应体系中的荧光强度与PRL的浓度成正比。

正常参考范围　女性:2.5～14.6ng/ml

　　　　　　　男性:2.3～11.5ng/ml

2.化学发光免疫分析法 样品中待测的PRL与鼠抗PRL单克隆抗体(m Ab)及碱性磷酸酶(ALP)标记的羊抗PRL另一位点单克隆抗体(ALP-g Ab)结合,形成双抗体夹心大分子免疫复合物m Ab-PRL-ALP-g Ab;当反应达平衡时,再加入联有羊抗鼠IgG抗体的磁性颗粒,即可捕获上述的抗原抗体复合物,在磁场的作用下自行沉淀。经洗涤并吸弃废液后加入发光底物AMPPD,在ALP的作用下迅速发出稳定的光量子。光量子与抗原抗体复合物的量(即PRL的量)成正比。

正常参考范围 正常情况下<400m U/L

3.电化学发光免疫分析法 待测标本、生物素化的抗PRL单克隆抗体与钌标记的抗PRL另一位点单克隆抗体在反应体系中混匀,形成双抗体夹心抗原抗体复合物。加入链霉亲和素包被的磁性微粒与之结合,在磁场的作用下,捕获抗原抗体复合物的磁性微粒被吸附至电极上,各种游离成分被吸弃。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的PRL含量成正比。

正常参考范围　女性:72.0～511.0m U/L

　　　　　　　男性:86.0～390m U/L

六、临床意义

1.雌二醇(E2) 由卵巢产生,是机体主要的雌激素,主要功能是刺激女性附件器官生长发育及副性特征出现。

(1)增高见于卵巢颗粒细胞瘤、肾上腺皮质瘤、性早熟、男性乳房发育症、女性妊娠期、肝硬化等。

(2)降低见于先天性卵巢发育不全、绝经期综合征、腺垂体功能减退、垂体性矮小症、妊娠中毒症、无脑儿等。

2.促卵泡生成激素(FSH) 是由腺垂体FSH细胞分泌的,主要生理作用是促进性腺成熟,可用于预测排卵时间、诊断不孕症等。

(1)增高见于卵巢或睾丸功能低下、女性先天性卵巢发育不良、原发性闭经、皮质类固醇治疗等。

(2)降低见于席汉综合征、晚期腺垂体功能减退、雌激素和孕酮治疗、继发性性腺功能减退、正常妊娠或哺乳期等。

3.促黄体生成激素(LH) 由腺垂体分泌,主要生理作用是促进性腺成熟。

(1)增高见于:排卵期、卵巢性侏儒症、患儿青春发育提前、卵巢功能早衰等。

(2)降低见于下丘脑性闭经、假性性早熟、垂体性性功能减退、急性危重病的妇女等。

4.睾酮(Test) 95%来自睾丸间质细胞,小部分来自肾小腺皮质。女性主要来自肾上腺皮质,其生理功能为刺激男性特征出现、发育、成熟。

(1)增高见于睾丸间质细胞瘤、性早熟、女性男性化、女性多毛症、多囊卵巢综合征、先天性肾上腺皮质增生症等。

(2)降低见于先天性睾丸发育不全综合征、下丘脑病变,如Kallman综合征、腺垂体功能减退、睾丸炎、性腺功能减退等。

5.孕酮(PROG) 是体内主要的孕激素,与雌激素协同作用于子宫内膜,形成月经周期,并在排卵后使基础体温升高;松弛子宫及内脏平滑肌;促进乳腺腺泡发育;促进水钠排泄等。

(1)增高见于正常妊娠、多胎妊娠、轻度妊娠中毒、先兆子痫、葡萄胎等。

(2)降低见于先兆流产或者流产成功、宫外孕、早产、绒毛膜癌、闭经等。

6.催乳素(PRL)

(1)增高见于垂体催乳素瘤、神经胶质瘤、甲状腺功能减退、性腺功能减退、服用某些药物等。

(2)降低见于原发性不孕症、多囊卵巢综合征、功能性子宫出血、乳癌次/全切术后等。